Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objectives of this study were: to determine the presence of prorenin and the receptor of (pro)renin [(P)RR] in cumulus cells (CC) and oocytes; evaluate the role of prorenin in the resumption of oocyte meiosis, ovulation and on levels of plasma progesterone (P4). The mRNA expression of prorenin and (P) RR was evaluated in oocytes and cumulus cells of the bovine species. The mRNA of prorenin and (P)RR was detected in CC, in oocytes only mRNA expression of (P)RR was found. The role of prorenin in the resumption of meiosis was determined from 3 experiments using a co-culture of cumulus-oocyte complex (COC) and follicular halves. In the first experiment, three different concentrations of prorenin (10-10, 10-9, and 10-8M) were tested, which stimulated the resumption of meiosis similar to the positive control and angiotensin II (Ang II). In experiment 2, the co-culture was supplemented with prorenin (10-10M) and aliskiren (direct inhibitor of renin, 10-3M, 10-5M and 10-7M). The aliskiren blocked the resumption of meiosis-induced by prorenin in all concentrations tested. The aliskiren (10-5M and 10-7M) was also evaluated in isolation in a culture system of COCs without follicular halves and the rate of oocytes that resumed meiosis was not different of the positive control. The third experiment was conducted to evaluate the stimulation of meiosis resumption by prorenin independent of Ang II using the combination of prorenin (10-10M) and saralasin [nonspecific Ang II receptor antagonist - Sar (10-5M)], which obtained a rate of oocytes at metaphase I (MI) similar to the positive control and treatments of AngII and prorenin. The prorenin also resumed the oocyte meiosis in a culture system of COCs suplemmented with forskolin, wicth blocks the meiosis by intracellular cAMP accumulation. To evaluate the regulation of (P)RR mRNA in the theca and granulosa cells by LH, cows who achieved follicular diameter ≥12mm after synchronization were submitted to the ovariectomy 0, 3, 6, 12 and 24 hours after GnRH analogue treatment. There was a higher mRNA expression of (P)RR in the theca cells at hour 6; and at hour 3 in the granulosa cells. The effect of (P)RR in ovulation and plasma P4 during luteinization was observed cows that were synchronized and induced by GnRH analogue (IM) associated for intrafollicular aliskiren (10-5M) or PBS (0hour/0day) and the ovulation was evaluated at 24, 48 and 72 hours by ultrasound, wicth was not different of the control (PBS). The leves of plasma P4 was analysed at day 6 and 8 after GnRH and intrafollicular treatment only in the cows that ovulated. The intrafollicular (P)RR blocks decreased plasma P4 at day 6. It was concluded that the prorenin / (P)RR participates in the peri-ovulatory period: in the resumption of oocyte meiosis independently of AngII, in the ovulation by LH stimulation to (P)RR mRNA and in the P4 synthesis during luteinization. / Os objetivos deste estudo foram: determinar a presença de prorenina e receptor de (pro)renina [(P)RR] nas células do cumulus (CC) e em oócitos; avaliar o papel da prorenina na retomada da meiose oocitária; na ovulação e sobre os níveis de progesterona plasmática (P4). A expressão do RNAm de prorenina e (P)RR foi avaliada em oócitos e CC da espécie bovina. O RNAm de prorenina e (P)RR foi detectado nas células do cumulus; nos oócitos ocorreu apenas expressão de RNAm de (P)RR. O papel da prorenina na retomada da meiose foi determinado a partir de 3 experimentos utilizando um sistema de co-cultivo de complexo-cumulus oócito (COC) e metades foliculares. No primeiro experimento, foram testadas três concentrações de prorenina (10-10; 10-9; e 10-8M), as quais estimularam a retomada da meiose semelhante ao controle positivo e angiotensina II (Ang II). No experimento 2, o co-cultivo foi suplementado com prorenina (10-10M) e alisquireno (inibidor direto de renina; 10-3M, 10-5M e 10-7M). O alisquireno bloqueou a retomada da meiose induzida pela prorenina em todas concentrações testadas. O alisquireno (10-5M e 10-7M) também foi avaliado isoladamente em sistema de cultivo de COC sem metades foliculares e a taxa de oócitos que retomaram a meiose não diferiu do controle positivo. O experimento 3 foi realizado para avaliar o estímulo da retomada da meiose pela prorenina independente da Ang II utilizando a associação de prorenina (10-10M) e saralasina [antagonista do receptor da Ang II - Sar (10-5M)], a qual obteve taxa de oócitos em metáfase I (MI) semelhante ao controle positivo e aos tratamentos AngII e prorenina. A prorenina também retomou a meiose oocitária em cultivo de COCs suplementado com forskolin, que bloqueia a meiose pelo acumulo de AMPc intracelular.Para avaliar a possível influência do pico de LH na expressão do RNAm de (P)RR nas células da teca e granulosa, vacas que apresentaram folículo ≥12mm de diâmetro após a sincronização farmacológica do ciclo estral foram ovariectomizadas 0, 3, 6, 12 e 24 horas após aplicação do análogo do GnRH. Houve maior expressão de RNAm de (P)RR nas células da teca na hora 6; e na hora 3 nas células da granulosa. O papel do (P)RR na ovulação e sobre a P4 plasmática durante a luteinização foi verificado em vacas sincronizadas farmacológicamente, induzidas pelo análogo de GnRH (IM) associado ao alisquireno (10-5M) ou PBS intrafolicular (hora 0/ dia 0) e foram avaliadas por ultrason 24, 48 e 72 horas quanto a ovulação, a qual não diferiu do controle (PBS). Os níveis de P4 plasmática foram analisados nos dias 6 e 8 após GnRH e tratamento intrafolicular apenas nas vacas que ovularam, nas quais o bloqueio de (P)RR reduziu P4 no dia 6. Concluiu-se que a prorenina/(P)RR participa do periodo peri-ovulatório: na retomada da meiose oocitária de forma independente da AngII, na ovulação pelo estímulo de LH sobre RNAm do (P)RR e na síntese de P4 durante a luteinização.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/10149 |
| Date | 28 February 2013 |
| Creators | Dau, Andressa Minussi Pereira |
| Contributors | Gonçalves, Paulo Bayard Dias, Mondadori, Rafael Gianella, Comim, Fabio Vasconcellos |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 500, 300, 300, 500, fcd33ccc-f08d-428c-b7da-9d3757cf0a96, 80caad6e-cd88-462a-8a8b-a44df32d0994, bbdd6ee4-1267-4b36-98ff-ba7e6d7a0ab7, 1251088f-87d7-4b52-baa6-8e5739b3bf79 |
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