Peptídeos sinais são moléculas envolvidas no crescimento, desenvolvimento e defesa de plantas. RALF (Rapid Alkalinization Factor) é um peptídeo sinal ubíquo no reino vegetal e que está envolvido com a expansão celular. Peptídeos RALF em Arabidopsis estão organizados em uma família multigênica de 37 membros, alguns com expressão tecido-específica, outros expressos em toda a planta. Este trabalho se insere dentro de um projeto maior que tem por objetivo esclarecer a função dos peptídeos RALF em plantas e determinar seu mecanismo de ação. Este trabalho teve dois objetivos específicos distintos. O primeiro consistiu em caracterizar as isoformas AtRALF19, AtRALF23, AtRALF31, AtRALF33 e AtRALF34 utilizando-se plantas mutantes, plantas superexpressoras e a análise dos promotores. O segundo objetivo específico foi identificar proteínas que interagem com o peptídeo AtRALF1 com o uso da técnica de purificação por afinidade em tandem (TAP) in planta. As análises fenotípicas das plantas transgênicas mostraram que plantas que superexpressam o gene que codifica o AtRALF33 apresentam fenótipo semi-anão, células foliares com área menor e com menor número de lóbulos. As plantas mutantes atralf33 e atralf23 apresentaram hastes e folhas maiores e células foliares com área maior. Plantas mutantes atralf34 não mostraram diferenças significativas quando comparadas com plantas selvagens e a análise do promotor do AtRALF34 mostrou uma expressão específica em estômatos, hipocótilo e ápice radicular. Com relação a purificação por afinidade, plantas mutantes mcca foram transformadas com a construção 35S:AtRALF1:HPB e usadas para obtenção dos extratos proteicos. / Peptides signals are molecules involved with growth, development and defense in plants. RALF (Rapid Alkalinization Factor) is an ubiquous peptide in plant kingdom and it is involved with cell expansion. RALF peptides are organized in a multigenic family with 37 members, some are tissue-specific expressed, others are expressed in whole plant. This work is part of a larger project that has the approach to clarify the RALF peptides functions in plants and to determine its mechanism of action. This work has two distinct approaches. The first specific approach was to characterize the isoforms AtRALF19, AtRALF23, AtRALF31, AtRALF33 and AtRALF34 using mutant plants, overexpression plants and promoters analysis. The second specific approach was to identify proteins that interact with AtRALF1 peptide using in planta tandem affinity purification (TAP). The phenotype analysis of transgenic plants showed that the overexpression of the gene which codifies AtRALF33 plants presented a semi-dwarf phenotype, smaller leaf cells area and number of lobes. The mutant plants atralf33 and atralf23 presented larger stalks and leaf cells. The mutant plants atralf34 did not show significant differences when compared to wild-type plants. The promoter analysis of AtRALF34 showed a specific expression in stomata, hypocotyls and root shoot. Regarding the TAP, mcca mutant plants were transformed with the construction 35S:AtRALF1:HPB.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-30042014-111146 |
| Date | 14 April 2014 |
| Creators | Ribeiro, Bianca |
| Contributors | Moura, Daniel Scherer de |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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