Itch est la seule ligase de l'ubiquitine de type C2-WW-HECT capable d'interagir avec les protéines à domaine SH3. Ce domaine est particulièrement représenté parmi les protéines régulatrices de l'endocytose. Les travaux présentés ici visaient à examiner la capacité d'Itch à interagir avec plusieurs protéines endocytiques. Nous avons utilisé la technique du BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer) pour examiner quelques protéines candidates. Nous avons ensuite confirmé les résultats obtenus par BRET avec des tests d'interaction in vitro, puis déterminé la capacité d'Itch à ubiquityler
les protéines liées via leurs domaines SH3. Nous avons ainsi découvert deux nouveaux partenaires d'interaction et substrats d'Itch parmi les protéines endocytiques, amphyphisine et pacsine. De plus, Itch interagit avec les domaines SH3 isolés d'intersectine, mais pas avec la protéine complète, suggérant que cette dernière n'est pas
un substrat d'Itch. Itch est donc bien positionnée pour exercer un rôle régulateur de l'endocytose en ubiquitylant ses substrats. / Itch is the only C2-WW-HECT type ubiquitin ligase that can bind SH3 domain
proteins. This domain is particularly frequent in accessory endocytic proteins. We have
used Bioluminescent Resonance Energy Transfer to examine a few candidate endocytic
proteins, in addition to the already known substrate of Itch, endophilin. We then used
standard in vitro techniques to confirm these interactions, and tested Itch capacity to
ubiquitylate these putative substrate proteins. We thus discovered two new substrates of
Itch, amphiphysin and pacsin. We also determined that although Itch interacts with the
isolated SH3 domains of intersectin, it does not recognize the full length protein, thus
rulling out Intersectin as a substrate of Itch. Itch is thus a putatively important regulator
of endocytosis, through its capacity to recognize and ubiquitylate several SH3-domain
proteins.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMU.1866/4314 |
| Date | 03 1900 |
| Creators | Desrochers, Guillaume |
| Contributors | Angers, Annie |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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