?rea de concentra??o: Farmacologia de produtos naturais e plantas medicinais. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-10-23T16:44:04Z
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Previous issue date: 2012 / A Pseudobrickellia brasiliensis (Asteraceae), conhecida como arnica-do-campo, ? uma planta nativa da flora brasileira cuja prepara??o alco?lica tem sido utilizada como anti-inflamat?rio pela medicina popular. No entanto, os mecanismos biol?gicos envolvidos nessa atividade, ainda n?o foram devidamente elucidados. Nesse contexto, o presente estudo avaliou o potencial anti-inflamat?rio de P. brasiliensis atrav?s da an?lise da produ??o de citocinas anti e pr?-inflamat?rias por leuc?citos mononucleares do sangue perif?rico. Foram utilizados extratos de P. brasiliensis ap?s extra??o com os solventes Acetato de Etila (ACE) e Etanol (ETA), ambos dilu?dos em Dimetilsulf?xido (DMSO), bem como o extrato aquoso dilu?do em PBS (AQU). A citotoxicidade dos extratos, ap?s 24h ou 5 dias de cultura celular, foi avaliada por meio da t?cnica de exclus?o com Azul de Tripan e, tais resultados foram confirmados por meio de ensaios de apoptose e necrose, ap?s marca??o com Anexina V-FITC e Iodeto de Prop?deo. No ensaio de inibi??o da produ??o de citocinas, C?lulas Mononucleares do Sangue Perif?rico humano (PBMC) foram incubadas em meio de cultura, contendo Miristato-Acetato de Forbol (PMA) e Ionomicina como agentes estimuladores, na aus?ncia ou presen?a do extrato AQU nas concentra??es finais de 0,025 mg/mL, 0,05 mg/mL ou 0,1 mg/mL. Tamb?m, foi avaliado o efeito do extrato AQU sobre a resposta proliferativa de linf?citos ao est?mulo mitog?nico Fitohemaglutinina (PHA) como teste complementar na an?lise de ativa??o celular. De acordo com os dados obtidos, os extratos ACE e ETA apresentaram um alto grau de citotoxicidade, sendo, portanto exclu?dos das an?lises posteriores, que avaliaram o perfil de produ??o de citocinas e prolifera??o. O extrato AQU, al?m de n?o induzir apoptose e necrose, n?o demonstrou a??o t?xica, mesmo ap?s 5 dias de cultura. Nas culturas tratadas com AQU na concentra??o final de 0,1 mg/mL foi observada redu??o significativa da express?o de IFN-? e TNF-? em resposta ? estimula??o com PMA e ionomicina. O efeito inibit?rio do extrato AQU, tamb?m, pode ser observado por meio da diminui??o da resposta proliferativa de linf?citos ao PHA. Estes achados sugerem que o efeito anti-inflamat?rio atribu?do ? P.brasiliensis na medicina popular pode, pelo menos em parte, ser devido ? inibi??o da produ??o de citocinas pr?-inflamat?rias por linf?citos, bem como da resposta proliferativa. Ensaios futuros, utilizando subst?ncias isoladas e identificadas a partir do extrato aquoso, s?o necess?rios para fortalecer os dados aqui apresentados e para demonstrar quais os mecanismos moleculares envolvidos nas a??es inibit?rias apresentadas no presente trabalho. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2012]. / ABSTRACT
Pseudobrickellia brasiliensis (Asteraceae), also known as ?Arnica-do-Campo? is a native plant from Brazilian flora and its alcoholic preparation has been used as anti-inflammatory in folk medicine. However, the biological mechanisms involved in the anti-inflammatory activity are not well elucidated. In this context, the present study evaluated the anti-inflammatory potential of P. brasiliensis by performing an anti- and pro-inflammatory cytokine analysis on human peripheral blood leucocytes as well as cell activation, measured by proliferation assay. We used P. brasiliensis extracts utilizing different solvents including Ethyl Acetate (ACE) and ethanol (ETA), both diluted in dimethylsulfoxide (DMSO), and aqueous extract (AQU) diluted in PBS. After 24h or 5 days, in vitro cytotoxicity promoted by those extracts was evaluated using the exclusion technique with Trypan Blue. Furthermore, apoptosis and necrosis was measured by Annexin V-FITC and propidium iodide staining, after 4 hours of culture. For cytokine production inhibitory assay, humans Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) were incubated in medium containing Phorbol Myristate Acetate (PMA) plus ionomycin as stimulating agents in the absence or presence of AQU extract at the final concentrations 0.025 mg/ml, 0.05 mg/ml or 0.1 mg/ml. We also assessed, as a complementary test for cellular activation analysis, the effect of AQU extract on lymphocytes proliferative response after mitogenic stimulation with Phytohemagglutinin (PHA). According to the obtained data, ACE and ETA showed a high cytotoxicity rate and, therefore, they were not used in cytokine and proliferative analysis. The AQU extracts, besides not inducing apoptosis and necrosis, showed no toxic effects even after 5 days of culture. In cultures treated with AQU extract at final concentration of 0.1 mg / ml was observed a significant reduction in IFN-? and TNF-? expression in response to PMA stimulation. The AQU extract inhibitory effect can also be observed by the decrease of lymphocytes proliferative rate in response to PHA stimulation. These findings suggest that P.brasiliensis anti-inflammatory effect can be, at least in part, due PBMC pro-inflammatory cytokines inhibition as well as the proliferative response. Further assays, using aqueous extract isolated and identified substances are needed to strengthen the presented data and to demonstrate the molecular mechanisms involved in inhibitory actions reported in this study.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:acervo.ufvjm.edu.br/jspui:1/716 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Almeida, Valeria Gomes de |
| Contributors | Teixeira, Mauro Martins, Melo, Gustavo Eust?quio Brito Alvim de |
| Publisher | UFVJM |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFVJM, instname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, instacron:UFVJM |
| Rights | A concess?o da licen?a deste item refere-se ao ? termo de autoriza??o impresso assinado pelo autor, assim como na licen?a Creative Commons, com as seguintes condi??es: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publica??o, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus reposit?rios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei n? 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permiss?es assinaladas, para fins de leitura, impress?o e/ou download, a t?tulo de divulga??o da produ??o cient?fica brasileira, e preserva??o, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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