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Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Phthirusa pyrifolia é uma planta hemiparasita conhecida como Erva-depassarinho
e muito utilizada na medicina popular. Visando conhecer melhor as
substâncias contidas nas folhas desta planta, o presente trabalho teve como objetivos, a
Purificação e Caracterização parcial de uma lectina, bem como Aplicações Biomédicas
envolvendo esta proteína. As folhas da planta foram coletadas no campus da
Universidade Federal de Pernambuco, lavadas, secas, trituradas e o Extrato Bruto (EB) a
10% (p/v) em solução de 0,15M NaCl foi obtido por agitação a 4ºC durante 4h, seguido
de filtração e centrifugação. No período de dois anos, novos extratos foram obtidos para
avaliação do ciclo sazonal na Atividade Hemaglutinante Específica (AHE) da lectina.
Este ensaio evidenciou que o EB obtido no mês de março apresentou maior AHE, sendo
submetido, então, à precipitação salina com sulfato de amônio. Do fracionamento salino
resultou a F20-40%, com maior AHE. Inicialmente, uma alíquota da F20-40% foi
cromatografada por afinidade em Sephadex G-100 utilizando 0,3M glicose como
eluente. Em seguida os picos que apresentaram Atividade Hemaglutinante (AH) foram
reunidos, dialisados, liofilizados e aplicados em cromatografia de troca iônica de CMcellulose.
A amostra adsorvida na coluna foi eluída com solução 0,5M Tris-HCl, pH
8,5. O pico que apresentou AH foi dialisado, liofilizado, submetido à SDS-PAGE e a
banda de protéica visualizada foi denominada PpyLL. O gel eletroforético na ausência
do agente redutor mostrou a lectina com uma banda de 15,6 kDa e em presença de
agente redutor, duas bandas com massas moleculares de 15,6 kDa e 7,8 kDa. PpyLL é
uma glicoproteína ácida com pH ótimo 7,5, termoestável até 70ºC, apresenta afinidade
por eritrócitos humanos tipo O+ e não foi inibida por açúcares simples, mas por frutose-
1,6-bifosfato e pelas glicoproteínas caseína, azocaseína e albumina de soro bovino. A
Fluorimetria mostrou que a 70ºC, a lectina apresentou uma alta intensidade de
fluorescência do aminoácido Triptófano, alterando assim a sua conformação. No Teste
de Avaliação da atividade antimicrobiana, a PpyLL mostrou atividade contra as
bactérias Staplylococcus epidermidis, Streptococcus faecalis, Bacillus subtilis e
Klebsiella pneumoniaee, e contra os fungos Fusarium lateritium e Rhizoctonia solani. A
nova lectina obtida através de um protocolo de purificação envolvendo cromatografias
de afinidade e troca iônica apresenta características de grande relevância, as quais
permitem a sua aplicação em processos biotecnológicos
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2250 |
| Date | 31 January 2009 |
| Creators | Marcos Pedrosa Brandão Costa, Romero |
| Contributors | das Graças Carneiro da Cunha, Maria |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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