Objetivos: O objetivo do rastreio pré-natal é detetar alterações no número ou estrutura dos cromossomas ou variantes genéticas patogénicas que causem doença. As técnicas de QF-PCR (Quantitative Fluorescent Polymerase Chain Reaction) e MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) têm sido usadas para a deteção rápida de aneuploidias cromossómicas. O cariótipo e o array-CGH (Array-comparative Genomic Hybridisation) são frequentemente usados como segundo teste. O objetivo deste estudo observacional retrospetivo foi avaliar os resultados da aplicação de métodos quantitativos MLPA e QF-PCR para a deteção rápida de aneuploidias cromossómicas no diagnóstico pré-natal e comparar o rendimento com as outras técnicas, nomeadamente o cariótipo e o array-CGH.
Desenho do estudo: Entre janeiro de 2000 e janeiro de 2021, 3696 amostras foram recebidas para teste de diagnóstico pré-natal. As amostras foram estudadas utilizando, em primeiro lugar, MLPA ou QF-PCR para uma deteção rápida de aneuploidias nos cromossomas 13, 18, 21, X e Y, e, numa segunda fase, com cariótipo, array-CGH ou ambos. Foram recolhidos dados relativos à indicação de referenciação. Os resultados do MLPA ou do QF-PCR foram classificados como normais, anormais ou inconclusivos. Os resultados do cariótipo e da array-CGH foram classificados como não disponíveis ou disponíveis e esperados ou não esperados.
Resultados: Dos 3696 casos identificados, 3659 foram avaliados. A indicação mais comum para os testes de diagnóstico foi um rastreio bioquímico positivo (31,4%), seguido de anomalias ecográficas (16,8%), idade materna avançada (15,9%) e a translucência da nuca aumentada (14,0%). 90,1% (3295/3659) dos resultados do MLPA ou QF-PCR foram normais e 9,9% (364/3659) apresentaram um resultado alterado. Depois do teste molecular, 3123 casos (85.4%) foram analisados apenas por cariótipo e 337 (9,2%) isoladamente por array-CGH. 79 (2.2%) das amostras foram testadas tanto pelo cariótipo como por array-CGH. Nenhum teste adicional foi realizado em 120 (3,3%) amostras. 93,3% (3414/3659) dos resultados do MLPA/QF-PCR foram concordantes com o resultado do teste subsequente. Foram detetados quatro resultados falsos negativos pelas técnicas moleculares devido a contaminação materna na amostra fetal.
Conclusões: Os resultados descritos estão de acordo com os reportados na literatura e destacam a importância das técnicas rápidas de diagnóstico molecular para a deteção de alterações cromossómicas num�\xA9ricas. O cariótipo e o array-CGH desempenham um papel importante para o estudo mais aprofundado de casos específicos, especialmente quando os resultados dos testes moleculares quantitativos rápidos são normais. / Objectives: The aim of prenatal screening is to detect alterations in the number or structure of chromosomes or pathogenic genetic variants that are the cause of disease. Quantitative Fluorescent Polymerase Chain Reaction and Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification have been used for the rapid detection of aneuploidies. Karyotyping and array-comparative genomic hybridisation (array-CGH) are often used as second test. The aim of this retrospective observational study was to evaluate the results of the application of MLPA and QF-PCR quantitative methods for the rapid detection of chromosomal aneuploidies in prenatal diagnosis and to compare the diagnostics yield with the other techniques, namely karyotype and array-CGH.
Study Design: Between January 2000 and January 2021, 3696 samples were received for prenatal diagnostic testing. Samples were studied using firstly MLPA or QF-PCR for a rapid detection of aneuploidies in chromosomes 13, 18, 21, X and Y, and on a second step with karyotype, array-CGH or both. Data concerning indication for referral was collected. MLPA or QF-PCR results were categorised as normal, abnormal, or inconclusive. The karyotype and array-CGH results were classified as non-available or available and expected or not expected.
Results: Of the 3696 cases identified, 3659 were evaluated. The most common indication for diagnostic testing was a positive biochemical screening (31.4%), followed by ultrasound abnormalities (16.8%), advanced maternal age (15.9%) and increased nuchal translucency (14.0%). 90.1% (3295/3659) of the MLPA or QF-PCR results were normal and 9.9% (364/3659) showed an altered result. After the rapid molecular testing, 3123 cases (85.4%) were analysed by karyotype alone and 337 (9.2%) by an isolated array-CGH. 79 (2.2%) samples were tested by both karyotype and array-CGH. No other test was performed in 120 (3.3%) samples. 93.3% (3414/3659) of the MLPA/QF-PCR results were compatible with the subsequent test. Four false negative results were detected due to maternal cell contamination.
Conclusions: These findings are in accordance with previous results reported in the literature and highlight the importance of the rapid molecular diagnostic tests for numerical chromosomal alterations. Karyotype and array-CGH play an important role for the further study of specific cases, especially when rapid quantitative molecular tests results are normal.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:up.pt/oai:repositorio-aberto.up.pt:10216/134534 |
| Date | 09 April 2021 |
| Creators | Maria Alexandra Lapa Pinto |
| Contributors | Faculdade de Medicina |
| Source Sets | Universidade do Porto |
| Language | English |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação |
| Format | application/pdf |
| Rights | restrictedAccess, https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ |
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