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Previous issue date: 2014-12-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to determine differences in the expression of virulence genes (invA) and antibiotic resistance (blaCTXM-2) from S. Heidelberg isolates resistant to antimicrobials and disinfectants. To do this, first isolates of S. Heidelberg (54), S. Enteritidis (54) and S. Typhimurium (54) were assessed by the disk diffusion test using ten antibiotics routinely applied in veterinary and human medicine. S. Heidelberg (17), S. Enteritidis (2) and S. Typhimurium (1) isolates resistant to cephalosporins (ceftiofur and ceftriaxone) were also evaluated by the technique of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Moreover, isolates of S. Heidelberg (17) resistant to ceftiofur by disk diffusion and MIC were subjected to dilution test tubes to determine the efficacy of disinfectants quaternary ammonium base, sodium hypochlorite and glutaraldehyde. Screening efflux was performed using ethidium bromide. The technique of antibiotic susceptibility showed 18, 16,9 and 9,6% of resistance for S. Heidelberg, S. Typhimurium and S. Enteriditis, respectively. High levels of resistance were observed for nalidixic acid in S. Heidelberg (67%), S. Typhimurium (65%), and S. Enteritidis (68.5%), as well as for tetracycline in S. Heidelberg (69%) and S. Typhimuirum (63%). The gentamicin resistance was also high for S. Typhimurium (31.5%) followed by S. Heidelberg (7%). Of great importance to the poultry industry, our results show significant resistance for ceftiofur among S. Heidelberg isolates (32%), differently from that observed for S. Enteritidis (3,7%), and S. Typhimuirum (1,9%). Only isolates of S. Heidelberg (9%) and S. Enteritidis (3,7%) showed resistance against ceftriaxone. By grouping the antibiotics used, it is observed that those belonging to the quinolone, penicillin and cephalosporin classes showed higher levels of resistance 68, 47 and 16%, respectively. The resistance pattern most commonly found was C on 10% of the isolates. It was also observed that 22,8% of the isolates were multidrug-resistant or resistant to more than three drugs. In relation to disinfectants, only one isolate of S. Heidelberg was resistant to the association of ammonium quaternary and glutaraldehyde. The isolates subjected to screening efflux system did not show the presence of this mechanism. All isolates of S. Heidelberg (17) expressed the invA gene with quantitative differences and the samples from the field showed higher expression (2.53) when compared to samples from the slaughterhouse (0.56). On the other hand, for the blaCTX-M2 gene, related to antibiotic resistance, the expression was 4.94 times greater in poultry meat samples. The expression of the gene invA allows us to conclude that S. Heidelberg isolates have pathogenic potential. But the pattern of resistance to ceftiofur and ceftriaxone associated with multidrug resistance and the positive results of gene expression, demonstrate the presence of ESBL producing bacteria, which could difficult the treatment of salmonellosis, as there is the potential for direct transmission of Salmonella from meat products to humans. . New studies in the future will allow in vivo evaluation to acess pathogenicity / O objetivo deste trabalho foi determinar as diferenças na expressão dos genes de virulência (invA) e de resistência aos antibióticos (blaCTXM-2) de isolados de S. Heidelberg resistentes aos antimicrobianos e desinfetantes. Para isso, primeiramente os isolados de S. Heidelberg (54), S. Enteritidis (54) e S. Typhimurium (54) foram submetidos ao teste do disco difusão frente a dez antibióticos utilizados rotineiramente na medicina veterinária e humana com intuito de avaliar o padrão fenotípico de resistência e multirresistência antimicrobiana. Os isolados de S. Heidelberg (17), S. Enteritidis (2) e S. Typhimurium (1) resistentes as cefalosporinas (ceftiofur e ceftriaxone) foram também avaliados pela técnica de Concentração Inibitória Mínima (MIC). Além disso, os isolados de S. Heidelberg (17) resistentes ao ceftiofur pelo disco-difusão e MIC foram submetidos ao teste de diluição em tubos para averiguar a eficiência dos desinfetantes a base de amônia quaternária, glutaraldeído e hipoclorito de sódio. Ainda foi feita a triagem do sistema de efluxo, utilizando o brometo de etídio. Pela técnica do antibiograma, os isolados de S. Heidelberg, S. Typhimurium e S. Enteriditis apresentaram 18, 16,9 e 9,6% de resistência, respectivamente. Os maiores níveis de resistência foram observados para o ácido nalidíxico nos isolados de S. Heidelberg (67%), S. Typhimurium (65%), e S. Enteritidis (68,5%), assim como para a tetraciclina nos isolados de S. Heidelberg (69%) e S. Typhimuirum (63%). A resistência à gentamicina também foi elevada para os isolados S. Typhimurium (31,5%), seguido da S. Heidelberg (7%). De grande importância para a indústria avícola, nossos resultados mostram significativa resistência para o ceftiofur entre os isolados S. Heidelberg (32%) diferente do observado para isolados de S. Enteritidis (3,7%) e S. Typhimurium (1,9%). Apenas os isolados de S. Heidelberg (9%) e S. Enteritidis (3,7%) apresentaram resistência frente ao ceftriaxone. Ao agrupar os antibióticos utilizados, observou-se que os pertencentes às classes quinolona, penicilina e cefalosporinas apresentaram os maiores níveis de resistência com 68, 47 e 16%, respectivamente. O padrão de resistência mais encontrado foi C em 10% dos isolados. Observou-se ainda que 22,8% dos isolados são multirresistentes, ou seja, resistentes a mais do que três drogas. Em relação aos desinfetantes, apenas um isolado de S. Heidelberg (ID 81) mostrou-se resistente a associação glutaraldeído-amônia quaternária. Os isolados submetidos a triagem do sistema de efluxo não mostraram a presença deste mecanismo. Todos os isolados de S. Heidelberg (17) expressaram o gene invA com diferenças quantitativas, sendo que as amostras provenientes do campo mostraram maior expressão (2,53) quando comparadas as de frigorífico (1,00). Por outro lado, para o gene blaCTX-M2, relacionado a resistência antimicrobiana, a expressão foi 4.94 vezes maior nas amostras advindas do frigorífico. A expressão do gene invA permitem concluir que as S. Heidelberg apresentam potencial patogênico. Já o padrão de resistência observado ao ceftiofur e ceftriaxone associado à multirresistência e aos resultados positivos da expressão gênica comprovam a existência de bactérias produtoras de ESBL, o que dificultaria o tratamento das salmoneloses, já que há o potencial de transmissão direta da Salmonella advinda dos produtos cárneos para cadeia alimentar humana, gerando danos à saúde pública. Novos estudos a serem conduzidos no futuro permitirão a melhor avaliação in vivo do grau de patogenicidade ao testar os isolados resistentes
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.udesc.br #179.97.105.11:handle/948 |
| Date | 11 December 2014 |
| Creators | Neves, Gabriella Bassi das |
| Contributors | Stefani, Lenita Moura |
| Publisher | Universidade do Estado de Santa Catarina, Mestrado em Ciência Animal, UDESC, BR, Ciências Veterinárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC, instname:Universidade do Estado de Santa Catarina, instacron:UDESC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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