Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-19T17:38:36Z
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Previous issue date: 2009 / O presente trabalho teve como objetivo testar diferentes crioprotetores na
criopreservação de tecido ovariano suíno. Ovários suínos (n=3) foram coletados em
abatedouro local. De cada ovário foram retiradas 10 fatias do córtex ovariano, sendo
uma imediatamente fixada (controle) e outra submetida ao cultivo in vitro (Controle
CIV). As outras 8 amostras foram criopreservadas, em pares, usando 4 diferentes
crioprotetores: DMSO (1,5 M), etilenoglicol (EG 1,5 M), glicerol (GLY 10%) ou
propanoglicol (PROH 1,5M) adicionados de 0,4% de sacarose. As amostras foram
congeladas pelo método lento e estocadas em nitrogênio líquido por 7 dias.
Posteriormente, o tecido ovariano foi descongelado, o crioprotetor foi removido por
lavagens sucessivas em meio contendo concentrações decrescentes dos
crioprotetores em questão e 0,4% de sacarose. Após a remoção do crioprotetor uma
amostra de cada tratamento foi imediatamente fixada e a outra colocada em cultivo
in vitro (CIV) com duração de 2 horas e em seguida fixada. As amostras foram
processadas para histologia e microscopia eletrônica de transmissão. A
porcentagem de folículos morfologicamente normais (FMN) após a criopreservação
utilizando DMSO (67,0±4,9), EG (81,8±1,4) e PROH (55,9±9,9) foi significativamente
menor (P<0,05) do que a observada no controle fresco (97,7±1,2). Quando o tecido
ovariano foi criopreservado com GLY, nenhum folículo morfologicamente normal foi
encontrado (0%). Depois do CIV, o tecido criopreservado com PROH (40,1±2,9)
apresentou a menor porcentagem de FMN quando comparado aos outros
tratamentos e ao controle (85,1±3,3 DMSO CIV; 84,6±3,4 EG CIV; 97,5±1,2 controle
CIV). Em geral, a ultraestrutura dos folículos criopreservados com DMSO ou EG,
antes e após o cultivo in vitro, foi similar. Apesar de sua ultraestrutura não ter sido
muito diferente do controle, algumas alterações leves puderam ser observadas. Em
conclusão, a criopreservação de tecido ovariano suíno utilizando DMSO ou EG
permite a preservação de um grande número de folículos pré-antrais com morfologia
normal. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The present work aimed to test different cryoprotectants on cryopreservation of pig
ovarian tissue. Pig ovaries (n=3) were collected at a local slaughterhouse. From each
ovary 10 cortex slices were taken, and one was immediately fixed (control) and
another placed in in vitro culture (IVC control). The other 8 samples were
cryopreserved, in pairs, using 4 different cryoprotectants: DMSO (1.5 M), etilene
glycol (EG - 1.5 M) glycerol (GLY - 10%) or propanediol (PROH - 1.5 M) with 0.4%
sucrose. Samples were slow cooled and stored in liquid nitrogen for 7 days. After
thawing and cryoprotectant removing, one sample from each treatment was
immediately fixed and the other was placed in in vitro culture (IVC) for 2h and then
fixed. Samples were processed for histology and transmission electron microscopy.
The percentages of morphologically normal follicles (MNF) in cryopreserved tissue
using DMSO (67.0±4.9), EG (81.8±1.4) and PROH (55.9±9.9) were significantly
lower (P<0.05) than the observed in fresh control tissue (97.7±1.2). When ovarian
tissue was cryopreserved with GLY no morphologically normal follicle could be found
(0%). After IVC, PROH (40.1±2.9) presented significantly lower percentage of MNF
compared to all other treatments and to the control (85.1±3.3 DMSO IVC; 84.6±3.4
EG IVC; 97.5±1.2 control IVC). In general, the ultrastructure of follicles cryopreserved
with DMSO or EG, before and after in vitro culture, was similar. Although their
ultrastructure was not very different from control follicles, some alterations could be
observed. Signs of advanced degeneration were not observed. In conclusion, the
cryopreservation of pig ovarian tissue using DMSO or EG allows a good number of
MNF.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/4011 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Borges, Emily Nóbrega |
| Contributors | Lucci, Carolina Madeira |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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