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Previous issue date: 2014-07-23 / Schistosomiasis is endemic in 74 countries, affecting more than 200 million people. In Brazil, Schistosoma mansoni is the only causative agent of schistosomiasis, which affects 19 states. Control measurements and effective treatment can result in a decrease of the parasitic load of individuals with the severe form. In this matter, when diagnostic methods with adequate sensitivity for monitoring are not used, those measurements may difficult diagnosis, favoring the persistence of the infection for long periods, as well as the environmental contamination and consequently exposure to local population reinfection. In these areas, or where there was recent introduction of S. mansoni, classic parasitological methods to find eggs in feces are not efficient. Although immunological and molecular techniques are currently considered as main diagnostic tools, parasitological methods re necessary to confirm the infection. Helmintex? has been recently described as highly sensitive diagnostic method that isolates eggs from 30 gram of feces through the interaction of eggs with paramagnetic microspheres in a magnetic field. Despite the sensibility, its limitation lies in the number of slides to be analyzed, making the process time consuming and not applicable for clinical routine. In this context, this work opens perspectives for the use of new tools in an attempt to optimize S. mansoni egg detection in the last step of the Helmintex?, using chemiluminescence, and ninhydrin staining. Another alternative tested was the ninhydrin staining. Helmintex? sediments containing S. mansoni eggs were fixed with 70% ethanol and deposited on Whatman Grade 541 filter paper, immersed in a solution of ninhydrin:ethanol (30: 70 %) for later eggs visualization at the optical microscope. Reading time for each filter was counted and registered. Ideal conditions for incubation with ninhydrin were established in 15 minutes at 24 ?C. Reading time for each sample was, in general, of 23 minutes. When compared to the original Helmintex? method, the use of ninhydrin decreased the reading time of the final sediment in, at least, 450 minutes. The results of this work showed that the implementation of new tools in existent diagnostic methods may contribute to a better performance of sensitive techniques with limited application in field studies, and open perspectives to new studies that aim to investigate and to optimize primordial steps of concentration methods. / A esquistossomose ? end?mica em 74 pa?ses, afetando mais de 200 milh?es de pessoas. No Brasil, o Schistosoma mansoni ? o ?nico agente etiol?gico da esquistossomose, que atinge 19 estados. Medidas de controle e tratamento efetivo podem resultar em diminui??o da carga parasit?ria de indiv?duos com a forma severa da doen?a. Assim, quando n?o forem utilizados m?todos diagn?sticos com sensibilidade adequada para acompanhamento, essas medidas podem dificultar o diagn?stico, favorecendo a perman?ncia da infec??o por longos per?odos, al?m da contamina??o ambiental e consequentemente a exposi??o ? popula??o local ? reinfec??o. Nestas ?reas, ou onde ocorreu introdu??o recente de S. mansoni, os m?todos parasitol?gicos cl?ssicos para encontrar ovos nas fezes n?o demonstram efic?cia. Embora as t?cnicas imunol?gicas e moleculares sejam consideradas atualmente as principais ferramentas de diagn?stico, s?o necess?rios m?todos parasitol?gicos para a confirma??o da infec??o. Recentemente, o Helmintex? foi descrito como um m?todo diagn?stico altamente sens?vel que isola ovos a partir de 30 gramas de fezes atrav?s da intera??o dos ovos com microesferas paramagn?ticos em um campo magn?tico. Apesar da sensibilidade, sua limita??o est? no n?mero de l?minas a serem analisadas, tornando o processo demorado e invi?vel para aplica??o na rotina cl?nica. Neste contexto, este trabalho abre perspectivas para a utiliza??o de novas ferramentas na tentativa de otimizar a detec??o de ovos de S. mansoni na ?ltima etapa do m?todo Helmintex?, utilizando a quimioluminesc?ncia, e a colora??o por ninidrina. Outra alternativa testada foi a colora??o do sedimento final com ninidrina. Os sedimentos de Helmintex? contendo ovos de S. mansoni foram fixados com etanol 70 % e depositados em papel filtro Whatman Grau 541, imersos em uma solu??o de ninidrina:etanol (30:70%) para posterior visualiza??o dos ovos corados em microsc?pio ?ptico. O tempo de leitura de cada filtro foi cronometrado. As condi??es ideais para incuba??o com a ninidrina foram estabelecidas em 15 minutos ? 24 ?C. O tempo de leitura para cada amostra foi, em m?dia, de 23 minutos. Em compara??o com o m?todo Helmintex? original, a utiliza??o de ninidrina diminuiu o tempo de leitura do sedimento final em, ao menos, 450 minutos. Os resultados deste trabalho mostraram que a implementa??o de novas ferramentas em m?todos diagn?sticos j? existentes podem contribuir para um melhor desempenho de t?cnicas sens?veis, por?m com aplica??o limitada em estudos de campo, e abrem perspectivas para novos estudos que visam investigar e otimizar etapas primordiais de m?todos de concentra??o.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/5508 |
| Date | 23 July 2014 |
| Creators | Favero, Vivian |
| Contributors | Graeff-teixeira, Carlos |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular, PUCRS, BR, Faculdade de Bioci?ncias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8198246930096637360, 600, 600, 36528317262667714 |
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