Introduction Leprosy is a disease caused by Mycobacterium leprae that affects an estimated 300,000 new cases each year. The LTA+80 A promoter allele, a strong leprosy risk factor (Alcais et al. 2007), has been shown to facilitate binding of the ABF1 transcriptional repressor in human B-cells (Knight et al. 2004). Direct studies on the impact of LTA+80 genotypes on LTA expression levels following exposure of human cells to M. leprae are missing. Results Comparative analysis of LTA expression in M. leprae stimulated and un-stimulated human blood samples revealed that LTA expression patterns did not differ between genotype groups. Observed LTA expression differences show a variable pattern within genotype groups suggesting a complex mechanism of action. Using a transient transfection assay, the LTA+80A allele was shown to exert significantly reduced activity relative to the "C" allele (P=0.01) in a Ramos B-lymphocyte cell line. These results follow the hypothesis that the LTA+80A allele has a repressing affect on expression. However, when the alleles were co-transfected with ABF1, there was no alteration of baseline expression levels, suggesting that ABF1 is not responsible for differential ability of the LTA promoter alleles to drive luciferase activity. Analysis of allele-specific expression in heterozygous cell lines using cross-linking experiments indicated that expression was not LTA+80 allele-specific as the allelic ratios were equal in presence and absence of cross-linking reagent. In addition, quantitative RT-PCR analysis of the two reporter constructs did not reveal an expression difference at the level of RNA alleles. Studies on posttranscriptional regulation indicated that LTA+80 does not affect translational efficiency, but rather impacts on regulation at the level of nuclear export, where LTA+80C is preferentially found in the cytoplasm (P=0.01). Further analysis, suggests LTA uses the CRM1 exp / IntroductionLa lèpre est une maladie causée par Mycobacterium leprae qui engendre environ 300 000 nouveaux cas chaque année. Il a été démontré que l'allèle A du promoteur de LTA+80, un important facteur de risque pour la lèpre (Alcais et al. 2007) se lie de manière sélective au répresseur de transcription ABF1 dans les cellules B humaines (Knight et al. 2004). Des études directes de l'impact des génotypes de LTA+80 sur l'expression de LTA suite à l'exposition de cellules humaines à l'antigène de M.leprae sont manquantes.RésultatsL'analyse comparative de l'expression de LTA dans les échantillons sanguins stimulés ou non-stimulés révèlent que l'expression des niveaux de LTA ne change pas d'un groupe génotypique à l'autre. Les differences d'expression de LTA observées se présentent sous un schéma variable à l'intérieur des groupes génotypiques ce qui indique un mécanisme d'action complexe. À l'aide d'un test de transfection transitoire, il fut montré que l'allèle « A » de LTA+80 stimulait signifivativement moins l'activité du rapporteur luciférase comparativement à l'allèle « C » (P=0.01) chez des lymphocytes B Ramos. Ces résultats vont de pair avec l'hypothèse selon laquelle l'expression de l'allèle A de LTA+80 est réprimée sélectivement. Cependant, lorsque les deux allèles de LTA+80 furent co-transfectées avec ABF1, aucune variation des niveaux d'expression de base ne fut observée, ce qui suggère que ABF1 n'est peut-être pas responsable de la capacité différentielle des allèles du promoteur de LTA à faire varier l'activité luciférase. Une analyse de l'expression spécifique à chaque allèle dans des lignées cellulaires hétérozygotes à l'aide d'expériences de pontage de la chromatine a indiqué que l'expression n'est pas spécifique aux allèles de LTA+80. Une analyse par RT-PCR quantitatif des deux constructions n'a pas révélé de différenc
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.66819 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Clouatre, Elsa |
| Contributors | Erwin Schurr (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Human Genetics) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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