The MMACHC gene is responsible for cblC, the most common inborn error of cobalamin metabolism in man. We created a knockout mouse model for its ortholog, Mmachc. Embryonic stem cells from 129 strain mice heterozygous for Mmachc containing a gene trap in intron 1 were injected into blastocysts from c57B6 mice to generate chimeras. Crossing chimeric males to c57B6 females generated heterozygous F1 mice. Geonotyping of F2 mice showed 36 wild type, 71 heterozygous and 3 homozygous. The three homozygous mutant F2 mice had a normal phenotype possibly due to alternative splicing causing expression of wild type Mmachc. Genotyping of embryos showed absence of homozygous mutants at e17.5, suggesting they died earlier. We observed phenotypes including open neural folds, amnionless-like, holoprosencephaly and abnormal limbs and face in individual homozygous mutant embryos. This work enables us to further clarify functions of Mmachc and the role of it in birth defects. / Chez l'homme, le gène MMACHC est responsable de la maladie cblC qui est l'erreur innée la plus commune de sentier de métabolique de la cobalamine. Nous avons créé un modèle de souris knockout pour son orthologue--Mmachc. Des cellules souches embryonnaires de type 129 heterozygotes pour un gène piégé dans l'intron 1 de Mmachc ont été injectées dans des blastocystes de type c57B6 afin de produire des chimères. Le croisement de mâles chimériques et de femelles de type c57B6 a produit des mutants hétérozygotes F1. Le génotypage a démontré 36 souris de type sauvage, 71 hétérozygotes et 3 homozygotes. Le génotypage a démontré l'absence d'embryons homozygotes mutants à e17.5, suggérant que les embryons homozygotes mutants sont morts avant e17.5. Nous avons observé des dysmorphologies telles que des plis neuronaux ouverts, un phenotype similaire à 'amnionless', de l'holoprosencephaly et des membres et visages anormaux dans les embryons homozygotes mutants. Les trois souris homozygotes mutantes qui ont survécues à la naissance avaient un phenotype normal. Elles exprimaient Mmachc de type sauvage et mutant, possiblement en raison d'un épissage alternatif.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.92168 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Liu, Jun Hui |
| Contributors | David Rosenblatt (Supervisor1), Loydie Majewska (Supervisor2) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Human Genetics) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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