Recent work published from our lab showed that modulation of the dynein motor complex affected HIV-1 viral production but not viral infectivity and that trafficking of viral components played an important role in assembly. It was further demonstrated that viral genomic RNA and the HIV-1 structural protein pr55Gag co-localized on LAMP-1 - a transmembrane glycoprotein found on endosomal and lysosomal membranes - late endosomal vesicles. Using the Lumio dyes fluorescein arsenical helix binder (FlAsH) and resorufin arsenical helix binder (ReAsH) and TC-tagged Gag-TC and pNL4-3TC constructs, we show the localization of newly synthesized pr55Gag through dual biarsenical labeling in the perinuclear region of HeLa cells. By overexpressing the p50/dynamitin-HA and RILP-myc proteins, we also show the physical interaction of newly synthesized pr55Gag and LAMP-1 late endosomal membranes. / Les récents travaux de notre laboratoire ont montré que la modulation du complexe moteur dynein (Dynein motor complex) avait un impact sur la production virale du VIH-1 mais pas sur son infectivité. Ainsi, le trafic de composantes virales joue un rôle important dans l'assemblage du virus. De plus, l'ARN génomique viral et la protéine structurelle pr55Gag du VIH-1 sont co-localisés sur les vésicules d'endosome tardif portant le marqueur LAMP-1, une glycoprotéine transmembranaire que l'on retrouve sur les membranes endosomales et lysosomales. En utilisant les molécules fluorescentes Lumio fluorescein arsenical helix binder (FlAsH) et resorufin arsenical helix binder (ReAsH) et des construits viraux portant une étiquette TC (Gag-TC et pNL4-3-TC), nous montrons que l'emplacement de pr55Gag nouvellement synthétisé se trouve dans la région péri-nucléique de cellules HeLa. En sur-exprimant les protéines p50/dynamitin-HA et RILP-myc, nous montrons également l'interaction physique entre les protéines pr55Gag nouvellement synthétisées et les vésicules d'endosomes tardifs marqués par LAMP-1.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.86856 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Lavigueur, Olivier |
| Contributors | Andrew J Mouland (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Medicine) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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