The aim of this study was to create a pancreatic ductal cell line model to study Notch signaling and its effect on endocrine differentiation. / Briefly, Notch2 was silenced in a pancreatic adenocarcinoma cell line, Panc 02.03, by transfecting cells with human Notch2 siRNA. Our results unexpectedly show that despite silencing Notch2, there is evidence of increased Notch pathway activation. First, there is a significant upregulation of Notch ligand Jag1 and Notch target Hes1. Hes1 in turn represses Ngn3, thus we see a significant downregulation of Ngn3. When Ngn3 is repressed, an endocrine fate is inhibited. This notion is supported by a downregulation of pro-endocrine transcription factors NeuroD1, Pax6, and IA1, and also a downregulation of endocrine genes such as insulin, glucagon, and pancreatic polypeptide. Lastly, our data show a significant downregulation of stemness marker Nestin, which further suggests that Panc 02.03 are in a more dedifferentiated state through an increased Notch pathway activation. / We suggest that there may be a compensatory mechanism to maintain Notch activation in Type 2 Diabetes Mellitus (T2DM) as well as in pancreatic adenocarcinoma despite Notch2 gene silencing. Our study thus poses a new question; is an aberrantly active Notch pathway under the master control of an alternate signaling mechanism in T2DM? Elucidating this question will be important in order to develop better therapeutic targets for the treatment of T2DM. / Le but de cette étude était de créer un modèle de cellules canalaires du pancréas pour étudier la signalisation du gène Notch et son effet sur la différenciation des cellules endocrines. / Brièvement, le gène Notch2 a été rendu silencieux dans une lignée de cellules pancréatiques cancéreuses, Panc 02.03, par transfection avec des siARN du gène Notch2. Nos résultats montrent que de manière inattendue, malgré que le gène Notch2 soit rendu silencieux, il y des evidences d'une augmentation de l'activation de la voie Notch. Premièrement, il y a une importante régulation positive du ligand du gène Notch, Jag1 et cible directe Hes1. À son tour, Hes1 réprime Ngn3, ce qui se traduit donc par une régulation négative significative de Ngn3. Ainsi, lorsque le gene Ngn3 est réprimé, la fonction endocrine est inhibée. Cette notion est soutenue par une régulation négative pro-endocrine de facteurs de transcription NeuroD1, Pax6 et IA1, et aussi une régulation négative des gènes endocriniens, tels l'insuline, le glucagon et le polypeptide pancréatique. Enfin, nos données montrent une régulation négative de marqueur des cellules souches, Nestin, qui suggère en outre les cellules Panc 02.03 sont dans un état plus dédifférencié par le biais d'une augmentation de l'activation du passage du gène Notch. / Nous suggérons qu'il y a peut-être des mécanismes de compensation pour maintenir l'activation de Notch dans le T2DM ainsi que dans l'adénocarcinome pancréatique malgré que le gène Notch2 reste silencieux. Notre étude pose donc une nouvelle question: Y a-t-il une activation abberante de la voie Notch dans le T2DM qui serait alors contrôlée par un autre mechanism alternative clé? Élucider cette question sera important afin de développer de meilleures cibles thérapeutiques pour le traitement du diabète de type 2 Mellitus.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.86863 |
| Date | January 2010 |
| Creators | D'Cunha, Mila |
| Contributors | Lawrence Rosenberg (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Surgery) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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