Elucidating novel anti-apoptotic regulatory pathways is central to further understanding the molecular basis of several pathologies, including cancer. The Bcl-2 protein family includes central regulators of the apoptotic process in mammalian cells, such as the antiapoptotic Bcl-2 and the pro-apoptotic Bax. Descriptions of apoptotic phenotypes in yeast induced by certain stressful stimuli, including the heterologous expression of Bcl-2 proteins, indicate the presence of an evolutionarily conserved apoptotic programme. We have previously reported the identification of several mammalian cDNAs effective in preventing the lethal effects of heterologous expression of a pro-apoptotic BAX cDNA in yeast (Yang et al., FEMS Yeast Research 2006; 6:751-762). Here we report that one of the Bax suppressors encodes a novel 156 amino acid variant of the human Vps24 protein, Vps24ß, that lacks the N-terminal lipid binding domain of the well characterized 222 residue Vps24 (Vps24a). We demonstrate that the VPS24ß cDNA represents an expressed transcript that is likely produced by alternative splicing of the human VPS24 gene. Vps24a, but not Vps24ß, prevented the temperature and salt sensitive growth defects observed in a yeast mutant lacking a functional VPS24 gene. In contrast, Vps24ß, but not Vps24a, suppressed the inhibitory effects of Bax on yeast growth. Vps24ß protein also suppressed the effects of Bax in mutants lacking other VPS genes suggesting that a functional ESCRT pathway, of which the yeast Vps24p is an essential component, is not required for Vps24ß function. Taken together, we demonstrate that the human VPS24 gene gives rise to two functionally distinct proteins, one of which is involved in the ESCRT pathway and another novel protein that serves an anti-apoptotic role. The apoptotic programme is evolutionarily conserved between yeast and metazoan organisms. The second complete manuscript included herein involves an additional suppressor, named Tsc22(86), that r / La détermination de nouveau cheminements de normalization anti-apoptotique est essentiel à la compréhension de plusieurs pathologies au niveau moléculaire, incluant le cancer et les maladies du coeur. La famille de protéines Bcl-2 inclu des agents de normalization centrales du processus apoptotique présents dans des cellules mammifères, dont l'anti-apoptotique Bcl-2 et le pro-apoptotique Bax. La description des phénotypes apoptotique contenus dans la levure induit par un stimulus aggressif, incluant l'expression hétérologue des protéines Bcl-2, indique la présence d'un programme apoptotique conservé durant l'évolution de ce dernier. Précédemment, nous avons reporté sur l'identification de plusieurs cADNs plutôt efficaces envers la prévention des éffets néfastes concernant l'expression hétérologue d'un BAX cADN pro-apoptotique dans la levure (Yang, Khoury et al., FEMS Yeast Research 2006; 6:751-762). Içi, je reporte le fait qu'un abrogeur Bax est en mesure d'encoder une nouvelle variante d'acide aminé 156 de la protéine humaine Vps24, nommé Vps24ß, qui n'est pas muni du domaine caractéristique d'aggripage de lipides à N-bornes qui se retrouve généralement dans le résidue 222 du Vps24 (Vps24a). Je démontre que le Vps24ß cADN représente une transcription qui est probablement produit par le processus alternatif d'épissement du gène humain Vps24. C'était le Vps24a, et non le Vps24ß, qui a empêché la croissance des défauts sensible au sel et à la température observés dans une affectation de levure qui ne possédait pas un gène Vps24 fonctionnel. Par contre, le Vps24ß, et non le Vps24a, a supprimé les éffets négatives du Bax envers la croissance de la levure. De plus, la protéine Vps24ß a aussi supprimé les éffets du Bax dans des échantillons le levure mutant manquant d'autres gènes VPS, qui suggèrent qu'une voie ESCRT fonctionnelle, ou le Vps24p est essentiel, n'est pas requis pour le Vps24ß. Pris ensembles, no
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.18762 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Khoury, Chamel Michael |
| Contributors | Michael Greenwood (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Doctor of Philosophy (Department of Medicine) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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