A coordinated response to DNA damage is vital to maintain cellular viability and prevent the onset of disease. In mammalian cells, the intra-S phase checkpoint regulator, ATR (Ataxia-telangiectasia mutated and RAD3-related) kinase coordinates the response to DNA damage to ensure the genome is accurately and completely replicated before the cell enters mitosis. Y box Binding Protein 1 (YB-1), a transcription and translation factor, has previously been implicated in cell proliferation and the development of chemotherapeutic resistance. YB-1 has been linked to a wide variety of cellular stresses, but has not been studied in the context of DNA replication. In this study, we determined that YB-1 associates to both the β-globin replication origin (origin-containing) and the control (origin-lacking) DNA regions. This observation suggested that YB-1 may be involved in DNA replication elongation instead of initiation. By immunoprecipiating YB-1, we identified that PCNA and MCM7 preferentially interact with YB-1 during S phase. The examination of the spatial and temporal dynamics of these interactions by immunofluorescence microscopy, however, did not reveal nuclear colocalization of these proteins. By treating cells with hydroxyurea to stall the replication fork, we re-examined the protein-protein interaction between YB-1 and MCM7 and found that following 8 hours of hydroxyurea treatment, YB-1 and MCM7 exhibited diffuse colocalization in the cell nucleus. This finding may implicate YB-1 in exerting a late-onset response to prolonged replication fork arrest either directly at stalled replication forks or at "dormant" origins bound by MCM complexes. A number of roles for YB-1 can be postulated, such as the requirement of YB-1 in facilitating the resumption of DNA replication, or the activation of additional origins to duplicate the genome in the presence of a replication stress. This finding may in turn account fo / Une réponse coordonnée lors de dommages à l'ADN est vitale pour le maintien de la viabilité cellulaire et pour éviter l'installation de maladies. Dans les cellules de mammifères, le point de contrôle de la phase S, la protéine kinase ATR (Ataxia-telangiectasia mutated and RAD3-related), coordonne la réponse aux dommages de l'ADN afin d'assurer une réplication complète et fidèle du génome avant l'entrée en mitose. La protéine YB-1 (Y box Binding Protein 1), un facteur de transcription et de traduction, est impliqué dans la prolifération cellulaire et la résistance aux chimiothérapies. YB-1 est également lié à une large variété de stress cellulaires but aucune donnée n'est disponible quant à son rôle dans la réplication de l'ADN. Lors de mon travail de Master, j'ai pu montrer qu'YB-1 s'associe à la fois à l'origine de réplication de la β-globine et dans les régions contrôles de l'ADN. Ce résultat suggère qu'YB-1 pourrait être impliqué dans la phase d'élongation de la réplication de l'ADN plutôt que dans celui de l'initiation. Par immunoprécipitation, j'ai identifié PCNA et MCM7 comme interacteurs préférentiels d'YB-1 en phase S. Par contre, en immunofluorescence, je n'observe pas de colocalisation nucléaire entre ces protéines. Lors du blocage de la fourche de réplication par un traitement à l'hydroxyurée, l'interaction entre YB-1 et MCM7 a été réexaminée et j'ai mis en évidence que 8h après le traitement, ces deux protéines présentent une co-localisation diffuse dans le noyau. Ces données indiquent qu'YB-1 pourrait être impliqué dans une réponse tardive suite à un arrêt prolongé de la fourche de réplication soit directement au point d'arrêt soit au niveau d'origines « dormantes » liées aux complexes MCM. YB-1 peut donc avoir plusieurs rôles tels que l'aide à la reprise de la réplication de l'ADN ou l'activation d'origines de réplicatio
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.66802 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Chan, Man Kid |
| Contributors | Maria Hadjopoulos (Internal/Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Biochemistry) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
Page generated in 0.002 seconds