Ligand-dependent corepressor LCoR was discovered almost ten years ago in the laboratory of Dr. John White through a yeast two-hybrid screen in which the ligand binding domain (LBD) of the estrogen receptor alpha (ERalpha) was used as bait. LCoR represses gene transcription by recruitment of the corepressor C-terminal binding proteins (CtBPs) and histone deacetylases (HDACs) through distinct domains. The action of HDACs strengthens the interactions of histones with negatively charged DNA resulting in stable nucleosomal and chromatin structures and repression of transcription. CtBPs interact with many transcriptional repressors through a common motif P/VLDLS/TXK/R, of which there are two in LCoR. We hypothesize that LCoR is a regulator of endogenous nuclear receptor target gene expression. Initial data characterized the function of LCoR as a nuclear receptor (NR) corepressor by using a series of in vitro and over expression assays. LCoR was also shown to have many protein-interacting domains that might contribute in its corepressor function. The goal of this thesis was to determine the role of LCoR in the control of endogenous estrogen and progesterone target gene expression. Through reporter gene assays with overexpression of LCoR and truncated forms of LCoR lacking the interacting domains, we have shown that both HDAC6 and CtBP1 contribute to transcriptional corepression observed with LCoR. To find out whether these cofactors are recruited to regulatory regions of endogenous ERalpha and PR target genes, ChIP and reChIP assays techniques were applied. These have shown a ligand-depenedent and orderly corecruitment of LCoR, HDAC6, CtBP1 and corresponding NR on estrogen and progesterone target genes. SiRNA-mediated gene silencing of LCoR, HDAC6 and CtBP1 in combination with reporter gene assay showed a transcriptional derepression in ERalpha- and PR-mediated gene transcription, confirming the transcriptional corepressor function of these coregulators. However, the in / Il y a dix ans, le laboratoire de Dr. John White a découvert un corépresseur nucléaire surnommer LCoR. La fonction du corépresseur est dépendante de la présence d'agoniste. LCoR a été découvert grâce au système du double hybride de levure pour lequel le domaine de liaison du ligand (LBD) du récepteur estrogen alpha (ERalpha) a été utilisé comme appât. LCoR inhibe la transcription d'un gene en s'associant avec le corépresseur C-terminal binding proteins (CtBPs) et les histones déacétylases (HDACs). L'association de LCoR avec ces deux familles protéiques ce fait à travers deux domaines distincts. L'action enzymatique des HDACs stabilisent les structures du nucléosome et des histones en renforçant les liens entres ces derniers et l'ADN. Cette stabilité structurale a pour but d'inhiber la transcription génique. Les CtBPs intéragissent avec un grand nombre de répresseurs transcriptionnel en s'associant au motif d'intéraction P/VLDLS/TXK/R, dont LCoR en possède deux. Nous émettons l'hypothèse que LCoR est un régulateur transcriptionnel des gènes cibles de récepteurs nucléaires in vivo. Les données initiales (basées sur des techniques in vitro) ont caractérisé LCoR en tant que répresseur de transcription médiée par les récepteurs nucléaires. Ces données ont également démontrée la contribution des cofacteurs CtBP1 and HDAC6 à l'activité trancriptionnelle répressive de LCoR. Le but de cette thèse est de déterminer le rôle de LCoR dans le contrôle transcriptionnel des gènes cibles des récepteurs nucléaires ERalpha et progestérone (PR) in vivo. Les immunoprécipitations chromatiques des cofacteurs LCoR, CtBP1, HDAC6, ERalpha et PR ont démontrée une association de ceux-ci aux éléments de réponses hormonales de manière ordonnées et séquentielles. L'ablation d'expression de LCoR, HDAC6 and CtBP1 par rapproche RNA inhibiteur a démontrée une perte de répression transcriptionnelle médiée par les expressions
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.86834 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Palijan, Ana |
| Contributors | John H White (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Doctor of Philosophy (Department of Physiology) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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