Protein methylation is a post-translational modification which can take place on both lysine and arginine residues. Classically, the characterization of these modifications on histones has shaped the field of epigenetics. These modifications are regulated by enzymes which specifically catalyze the transfer of a methyl group from a methyl donor to the amino groups of lysine or arginine residues. Methylation of non-histone proteins has also been proven to be crucial in many cellular processes. Understanding the role that protein methylation plays in DNA damage has elucidated the function of many proteins involved in the complex signalling cascade occurring at double-stranded DNA breaks (DSBs). Examining protein methylation has allowed us to identify new proteins implicated in DNA damage and to better clarify the function of existing proteins involved in the DNA damage response. The work presented in this thesis aims to develop new ways to identify methylated proteins involved in DNA damage as well as to verify any functional relevance of newly discovered proteins. Tudor domains traditionally have been shown to bind methylated residues. P53-binding protein 1 (53BP1) is a prominent mediator of DNA damage response and is recruited to DSBs via its tandem Tudor domain by binding methylated lysine on H4 histone protein. A proteomic screen of 53BP1's Tudor domain showed that it could bind brahma-related gene 1 (BRG1), a critical part of the human chromatin remodelling complex. One of the goals of the work presented in this thesis was to verify any in vivo significance of this interaction and if the chromatin remodelling complex plays a significant role in DNA damage response. The existence of an endogenous interaction was verified by a co-immunoprecipitation of BRG1 with 53BP1. In vivo methylation assay showed that BRG1 does in fact contain methylated residues. I hypothesised that 53BP1 could recruit BRG1 to DNA damage sites via this interaction, however, extensive analy / La méthylation de protéines est une modification post-translationelle qui a lieu sur des résidus de lysine et d'arginine. Classiquement, la caractérisation de ces modifications sur les histones a formé le domaine de l'étude épigénétique en expliquant le règlement de l'expression des gènes. Ces modifications sont réglées par les enzymes qui catalysent spécifiquement le transfert d'un groupe méthylique à partir d'un donateur méthylique aux groupes aminés des résidus de lysine ou d'arginine. On s'est également avéré que la méthylation des protéines non-histone est cruciale dans plusieurs des processus cellulaires. Un meilleur arrangement du rôle que la méthylation de protéines joue dans le dommage d'ADN a élucidé la fonction de nombreux protéines impliquées dans une cascade de signalisation complexe se produisant aux cassures double-brin (CDB). L'étude de la méthylation de protéines nous a permise d'identifier des nouvelles protéines impliquées dans le dommage d'ADN et de clarifier la fonction des protéines existantes impliquées dans la réponse au dommage d'ADN. Cette thèse a comme objectif de développer des nouvelles méthodes pour identifier les protéines méthylées impliquées dans le dommage d'ADN et de vérifier la pertinence fonctionnelle des protéines nouvellement découvertes. Les domaines de Tudor traditionnellement ont été démontrés de lier les résidus méthylés. La protéine 53BP1 est une médiatrice de la réponse au dommage d'ADN et est recrutée aux CDBs par l'intermédiaire de son domaine tandem de Tudor en liant la lysine méthylée aux protéines de l'histone H4. Un écran protéomique des domaines de Tudor 53BP1 a prouvé qu'il pourrait lier le gène BRG1, une partie critique de la chromatine humaine transformant le complexe. Un des buts du travail présenté dans cette thèse est de vérifier la signification in vivo de cette interaction et de déterminer si la chromatine transformant le complexe j
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.86896 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Salim, Ali |
| Contributors | Stephane Richard (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Medicine) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
Page generated in 0.0016 seconds