TMED2 is a member of the p24 family of proteins involved in vesicle transport between the endoplasmic reticulum (ER) and Golgi. TMED2 localizes predominantly in the ER Golgi Intermediate Compartment, where it is proposed to function as a receptor for specific protein cargoes and coat proteins. We have shown that TMED2 is expressed and required in the mouse placenta. In fact, mouse embryos with mutations in Tmed2 fail to form syncytiotrophoblast cells, a cell type, which is critical for labyrinth placenta function. Expression of TMED2 is conserved in human placentas, and we reported expression of TMED2 between 5.5 and 40 weeks of gestation in all trophoblast cell types, including the syncytiotrophoblast. Moreover, early in gestation TMED2 was more highly expressed in cytotrophoblast cells versus syncytiotrophoblast. In addition, we found that TMED2 was more highly expressed in the BeWo choriocarcinoma cell line, which differentiates to form syncytiotrophoblast, when compared to JEG-3 cells, which do not form syncytiotrophoblast. The Aim of this study is to determine if TMED2 is sufficient or required during syncytiotrophoblast differentiation. Methods: in this study we generated JEG-3 cell lines with stable expression of EGFP, N-terminal tagged EGFP and tagged EGFP-TMED2. We employed different approaches such as: Immunofluorescence, PCR and Western blot analysis to examine differentiation of the stably transfected cell lines. We found that ectopic expression of TMED2 in JEG-3 resulted in a significant increase of syncytiotrophoblast formation when compared to normal or EGFP transfected JEG-3 cells. Our preliminary results suggest that TMED2 is sufficient to induce fusion in JEG-3 cells. In the future we will generate BeWo cell lines with knockdown of TMED2 in order to determine if this gene is required for syncytiotrophoblast formation in these cells. / TMED2 est un membre de la famille de protéines p24, impliquées dans le transport vésiculaire entre le réticulum endoplasmique (RE) et l'appareil de Golgi. La protéine TMED2 se localise principalement dans le compartiment intermédiaire RE/Golgi, dans lequel il est proposé qu'elle fonctionne comme un récepteur pour des cargos de protéines spécifiques et des protéines d'enveloppe. Nous avons démontré que TMED2 est exprimée et requise dans le placenta de souris. Les embryons de souris avec des mutations dans Tmed2 ne parviennent pas à former de syncytiotrophoblaste, un type de cellules qui est essentiel pour la fonction du labyrinthe du placenta. L'expression de TMED2 est conservée dans les placentas humains, et nous avons rapporté son expression entre 5,5 et 40 semaines de gestation dans tous les types de cellules du trophoblaste, y compris le syncytiotrophoblaste. Au début de la gestation, TMED2 est plus fortement exprimée dans les cellules du cytotrophoblaste que le syncytiotrophoblaste. Finalement, nous avons constaté que TMED2 est plus fortement exprimée dans la lignée de cellules de choriocarcinome BeWo, qui se différencie pour former le syncytiotrophoblaste, comparativement aux cellules JEG-3, qui ne le forment pas. Le but de cette étude est de déterminer si TMED2 est suffisante ou nécessaire au cours de la différenciation des syncytiotrophoblastes. Méthodes : Dans cette étude, nous avons généré des lignées de cellules JEG-3 qui expriment de façon stable la protéine EGFP, EGFP fusionnée avec une étiquette en N-terminal, ainsi que la protéine de fusion EGFP-TMED2. Nous avons utilisé des approches telles que l'immunofluorescence, le PCR et l'immunobuvardage de type Western pour étudier la différenciation des lignées de cellules transfectées de façon stable. Nous avons constaté que l'expression ectopique de TMED2 dans les cellules JEG-3 conduit à une augmentation significative de la formation du syncytiotrophoblaste par rapport à la normale ou de cellules transfectées avec les protéines de fusion EGFP-TMED2. Nos résultats préliminaires suggèrent que TMED2 est suffisante pour induire la fusion dans les cellules JEG-3. Dans l'avenir, nous allons générer des lignées cellulaires BeWo avec une invalidation génique transitoire (knockdown) de TMED2 afin de déterminer si ce gène est également nécessaire pour la formation de syncytiotrophoblastes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.121495 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Heba, Taghreed |
| Contributors | Loydie Majewska (Internal/Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Human Genetics) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses |
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