Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La proteína quinasa CK2 es una quinasa ubicua que fosforila serinas y treoninas de
un gran grupo número de proteínas celulares. La holoenzima CK2 existe como un
tetrámero (CK2a2b2) donde CK2a es la subunidad catalítica con actividad proteína quinasa
y CK2b es la subunidad regulatoria que modula la actividad y confiere estabilidad a CK2a.
CK2 es una enzima muy conservada en diferentes especies, es esencial para la viabilidad
celular y está presente en distintos compartimientos y organelos celulares. Además, CK2 ha
sido encontrada unida a la cara externa de la membrana plasmática, actuando como
ectoquinasa, catalizando la fosforilación de distintas proteínas extracelulares y regulando
distintos procesos como migración, adhesión y proliferación celular. Estudios previos
utilizando la transfección de células HEK293T en cultivo, han demostrado que es necesaria
la expresión de ambas subunidades a y b para la aparición de actividad ectoquinasa en la
superficie celular. La ectoquinasa se libera de la membrana en la presencia de sustratos
específicos.
El presente trabajo exploró la posibilidad de que la subunidad regulatoria CK2b
pudiera exportar al medio extracelular otra proteína unida covalentemente a su cadena
polipeptídica. El modelo experimental consistía en la cotransfección de células HEK293T
en cultivo celular, con DNAs que codifican para las proteínas de fusión a CK2b y la CK2a.
Se utilizó dos tipos de de proteínas de fusión: la glutathion S-transferasa unida a CK2b
(GST-CK2b) y la proteína fluorescente verde también unida a CK2b (GFP-CK2b), en
ambos casos la unión fue al extremo amino-terminal de CK2b. Se observó que estas
proteínas de fusión se expresan, junto con CK2a, a niveles de actividad catalítica
parecidos, pero siempre menores a los observados con la expresión de CK2b no
modificada. Los resultados mostraron consistentemente a la proteína de fusión en los
lisados celulares, pero no fue posible de detectarlas en el medio extracelular. Para estos
análisis se utilizaron técnicas muy sensibles como inmunoprecipitación específica, ensayos
de actividad catalítica e inmunoblot (western blot). Se concluye que la fusión de CK2b con
otra proteína no altera per se el proceso de expresión de la proteína ectópica, pero si inhibe
su traspaso por la membrana plasmática hacia el medio extracelular, posiblemente debido a la orientación estérica de las moléculas recombinantes usadas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/130983 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Contreras Gallardo, Carlos Antonio |
| Contributors | Allende Rivera, Jorge, Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Departamento de Ciencias Biológicas Animales |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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