Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T05:49:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1
282748.pdf: 2126494 bytes, checksum: bab8f4f79e0eef0fde549df05362db87 (MD5) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial tripanocida in vitro e in vivo do ácido gálico e derivados (galatos de octila, decila, undecila, dodecila e tetradecila). O efeito tripanocida in vitro foi avaliado contra formas tripomastigotas sanguíneas e amastigotas intracelulares de T. cruzi. Os galatos de octila, dodecila e tetradecila reduziram em 50 a 60% a viabilidade de tripomastigotas sanguíneos (cepaY) na concentração de 50 µM. Entretanto, nenhum deles foi mais ativo do que o quimioprofilático violeta de genciana. Contrariamente, todos os ésteres de galato foram mais ativos in vitro do que o benzonidazol contra formas amastigotas intracelulares das cepas Y e Colombiana, com percentuais de inibição (PI) variando entre 46 a 95% na concentração de 3 µM. Entretanto, os galatos foram mais citotóxicos do que o benzonidazol, sendo que somente o galato de dodecila apresentou índice de seletividade (IS) acima de 50. O uso combinado desse composto com o benzonidazol mostrou um efeito aditivo in vitro contra amastigotas intracelulares. A análise ultraestrutural por MET mostrou que o galato de dodecila induziu alterações morfológicas em epimastigotas e em amastigotas intracelulares, com expressiva perda de conteúdo citoplasmático e número de reservossomos, intumescimento da mitocôndria, mas sem alteração do cinetoplasto. Ensaios de inibição in vitro com a tripanotiona redutase recombinante de T. cruzi (TcTR) mostraram que o ácido gálico inibiu esta enzima (CI50 = 45,6 µM) sem interferir na atividade da glutationa redutase (GR). Contrastando com a potente atividade tripanocida in vitro, nenhum dos compostos suprimiu a parasitemia e preveniu a mortalidade de camundongos em fase aguda e crônica da tripanosomíase. Entretanto, a análise histopatológica mostrou que a maioria dos animais tratados com o ácido gálico ou com o galato de dodecila apresentou tecido cardíaco íntegro sem focos inflamatórios. A análise por RT-qPCR do perfil de citocinas transcritas no coração de camundongos infectados com a cepa Colombiana mostrou menor taxa de IFN-. no grupo tratado com o galato de dodecila, sugerindo uma participação na imunomodulação do processo inflamatório. Conclui-se que os galatos testados apresentaram um potente efeito tripanocida in vitro e, embora não tenham modificado os cursos da infecção experimental aguda e crônica, podem ter uma participação no controle da inflamação tecidual via imunomodulação negativa do IFN. / The aim of this study was to evaluate the potential trypanocidal activity in vitro and in vivo of gallic acid and five esters (octyl, decyl, undecyl, dodecyl and tetradecyl gallate). The in vitro trypanocidal activity of the compounds was evaluated against blood trypomastigotes and intracellular amastigotes of T. cruzi. Incubation of mice infected blood (Y strain) for 48 hours with octyl, dodecyl and tetradecyl gallates at 50 µM revealed a trypanocidal effect higher than 50%, which was, however, lower than the trypanocidal effects exhibited by gentian violet. In contrast, all gallate esters showed a higher in vitro activity than benzonidazole against intracellular amastigotes of both the Y and Colombiana strains, with percentages of inhibition (PI) ranging from 46 to 95% at 3 µM. However, most of the gallic acid derivatives showed significant cytotoxic effects, with the exception of dodecyl gallate which presented a selectivity index (SI) higher than 50. Moreover, the use of dodecyl gallate + benzonidazole showed also an additional in vitro effect against intracellular amastigotes. The ultrastructural analysis by transmission electron microscopy (TEM) showed that the treatment with dodecyl gallate induces drastic morphological changes in both the epimastigotes and intracellular amastigotes. This effect is characterized by a significant loss of cytoplasmic content, reduction of the reservosome numbers, mitochondria swelling and no kinetoplastic change. In vitro assays revealed that gallic acid specifically inhibited the T. cruzi recombinant trypanothione reductase (TcTR) (IC50 = 45.6 µM). In contrast to the powerful trypanocidal activity in vitro, none of the compounds were able to suppress parasitemia or prevent the mice mortality at the acute and chronic phases of trypanosomiasis. However, histopathological analysis showed that the most of the mice treated with gallic acid and dodecyl gallate showed no inflammatory foci in the heart. The RT-qPCR analysis for cytokine profile in the heart tissue of infected mice with the Colombiana strain revealed a lower rate of IFN-. in the group treated with dodecyl gallate, suggesting a possible role of this compound in the immune modulation of the inflammation. We conclude that the gallates tested showed a potent trypanocidal effect in vitro and, although they have not changed the course of acute and chronic experimental infection may be involved in the control of tissue inflammation through negative immune modulation of IFN-
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/94039 |
| Date | 25 October 2012 |
| Creators | Eger, Iriane |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Steindel, Mario |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 1 v.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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