Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Blackleg is an acute and often fatal infection that affects mainly cattle, whose causative agent is Clostridium chauvoei. In this study two experiments were presented, the first with the aim of facilitating the collection and material storage in common filter paper for laboratory diagnosis of blackleg by using PCR (polymerase chain reaction). For this we tested in vitro, the sensitivity, specificity and feasibility of this method over different storage periods at room temperature. For the viability test we used twelve bovine liver tissues which ten samples were impregnated with a suspension containing C. chauvoei inoculum and the tests were performed at 24h, 48h, 72h, and one week of storage. The sensitivity of the technique was not affected by the use of common filter paper. There were no cross-reactions and no amplifications were observed from the negative control samples. Direct PCR by using common filter paper showed amplification in 50% of the samples at 24 h, 100% at 48h, 70% at 72h, and 90% within one week of storage at room temperature. This method demonstred to be a practical and economical alternative for collection, storage and material shipment for molecular diagnosis of blackleg. Second experiment aimed to verify the potency of immunization provided by two polyvalent clostridial vaccines (A and B vaccines) tested against the field strain (SBP 07/09) and the reference strain (MT) of C. chauvoei. The assays were made through of challenge in immunized guinea pigs, officially used by the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA, Brazil) (equivalent to Department of Agriculture) and subsequent evaluation of the humoral response of guinea pigs by ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) was done. At the end of the experiment, all vaccinated guinea pigs remained alive and no clinical signs of the disease were observed, while the control group showed characteristic blackleg clinical signs and died within 24 to 48 hours. The vaccines tested were effective in stimulating the humoral response against both field strain SBP 09/07 and the reference strain MT of C. chauvoei. All four vaccinated and challenged groups seroconverted by the ELISA after vaccination and the control group remained seronegative. However, animals immunized with B vaccine had higher levels of antibodies detected when compared with guinea pig immunized with A vaccine. This work has important contributions to the prevention and development of diagnostic methods for blackleg, a relevant disease with economic and animal health impact. / O carbúnculo sintomático é uma infecção aguda e geralmente fatal que acomete principalmente os bovinos, cujo agente etiológico é Clostridium chauvoei. Neste estudo foram apresentados dois experimentos, o primeiro com o objetivo de facilitar a coleta e armazenamento de material em papel filtro comum, para diagnóstico laboratorial do carbúnculo sintomático por PCR (polymerase chain reaction) direta. Para isto, foram testadas, in vitro, a sensibilidade, especificidade e viabilidade do método em decorrência do tempo e à temperatura ambiente. Para o teste de viabilidade, foram utilizados os tecidos hepáticos de doze bovinos, sendo dez impregnados com uma suspensão de C. chauvoei. Os testes foram realizados nos períodos de 24h, 48h, 72h e uma semana após impregnação do papel filtro comum armazenado à temperatura ambiente. A sensibilidade da técnica não foi comprometida com o uso do papel filtro comum. Não foram observadas reações cruzadas e amplificações a partir das amostras controle negativas. A PCR direta do papel filtro comum apresentou amplificação em 50% das amostras nas 24h, 100% nas 48h, 70% nas 72h e 90% no período de uma semana de armazenamento à temperatura ambiente. Este método demonstrou ser uma alternativa prática e econômica para coleta, armazenamento e remessa de material para diagnóstico molecular de carbúnculo sintomático. O segundo experimento teve como objetivo verificar a eficiência da imunização proporcionada por duas vacinas clostridiais polivalentes (vacinas A e B) testadas frente à cepa de campo (SBP 07/09) e a cepa de referência (MT) de C. chauvoei. Os testes ocorreram por meio do desafio em cobaias imunizadas, utilizado oficialmente pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA) e posteriormente foi avaliada a resposta humoral dos animais pelo teste de ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Ao final do experimento, todas as cobaias vacinadas estavam vivas e sem sinais clínicos da doença, enquanto os animais dos grupos controle apresentaram sinais característicos da doença e morreram no período de 24 a 48 horas. As vacinas testadas foram eficientes em estimular resposta humoral tanto frente à cepa de campo de C. chauvoei quanto frente à cepa de referência MT. Quanto à resposta humoral evidenciada pelo ELISA, os quatro grupos vacinados e desafiados soroconverteram após a vacinação e os animais do grupo controle permaneceram soronegativos. Contudo, os animais imunizados com a vacina B apresentaram maiores níveis de anticorpos detectados quando comparados com os animais imunizados com a vacina A. O presente trabalho trouxe contribuições no processo de prevenção e desenvolvimento de métodos diagnósticos para o carbúnculo sintomático, uma relevante doença, tanto do ponto de vista econômico quanto da saúde animal.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/10131 |
| Date | 24 February 2011 |
| Creators | Farias, Luana D'avila |
| Contributors | Vargas, Agueda Palmira Castagna de, Costa, Mateus Matiuzzi da, Botton, Sonia de Avila |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 500, 300, 500, 7561081c-bfab-4ea7-ace8-2bf6488cb0b5, 89d0c2ac-54d6-4a2c-be46-8dab6689f5ee, 2f2ea4c0-3c6f-4891-b353-f9ae3392f67c, 24806e8f-fdc9-4fdd-9936-d012e1f365ba |
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