Le canal sodique épithélial, ENaC, est une protéine hétéromérique constituée de trois sous-unités: [alpha], [bêta] et [gamma]. ENaC est exprimé au niveau de la membrane apicale des cellules épithéliales du néphron, du colon distal et des voies aériennes. Au niveau du néphron, l'activité et l'expression de ENaC sont finement régulées par deux hormones: l'aldostérone et la vasopressine, ce qui fait de ENaC un élément clé du maintient de la pression artérielle. ENaC joue également un rôle dans la régulation de la pression artérielle dans le colon distal. Il existe plusieurs mutations du canal directement liées à des troubles graves de la pression artérielle: le syndrome de Liddle et le pseudoaldostéronisme de type I (PHA I). La première pathologie est un gain de fonction du canal provoquant une hypertension précoce et sévère alors que le PHA I est une perte de fonction caractérisée par une diminution de la réabsorption sodium et une hypotension. ENaC est également une cible thérapeutique de choix dans les hypertensions de type 1. Il a récemment été démontré que la sous-unité [alpha] ENaC était impliquée dans l'augmentation de l'activité du canal de cobaye mais pas de rat par deux ligands extra-cellulaires: le cpt-cAMP un analogue perméant de l'AMPc, et le glibenclamide, un inhibiteur des canaux K[indice inférieur ATP]. Notre objectif est de déterminer les sites d'interaction des ces ligands avec ENaC ce qui permettra de mieux comprendre la relation structure/fonction de la boucle extra-cellulaire. Des techniques de biologie moléculaire nous ont permis de construire des sous-unités [alpha] chimériques contenant des séquences de rat et de cobaye. Ces chimères ont été coexprimées dans l'ovocyte de xénope avec les sous-unités [bêta] rat et [gamma] rat et les courants macroscopiques ont été enregistré en voltage clamp à deux électrodes. Nous avons ainsi déterminé que les régions centrales et terminales de la boucle extra-cellulaire de la sous-unité [alpha]gp conféraient une sensibilité partielle au cpt-cAMP. La réalisation de mutants nous a permis d'identifier cinq acides aminés dans la région terminale de la boucle dont une isoleucine en position 510 indispensable à l'activation du canal par le cpt-cAMP. Nous avons montré en patch clamp en configuration"outside out" que cette augmentation du courant macroscopique résultait d'une augmentation de la NPo du canal et non de sa conductance unitaire. Concernant l'interaction entre le glibenclamide et la sous-unité [alpha], nous avons employé la même approche que pour le cpt-cAMP. Nos résultats préliminaires indiquent que la totalité de la boucle extra-cellulaire est impliquée dans l'interaction avec le glibenclamide. Comme pour le cpt-cAMP, la région terminale de la boucle extra-cellulaire confère la plus grande sensibilité au ligand. Cependant, nous n'avons pas identifié tous les acides aminés interagissant avec le glibenclamide. Nous soupçonnons l'isoleucine 510 de jouer un rôle dans cette interaction.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usherbrooke.ca/oai:savoirs.usherbrooke.ca:11143/3867 |
| Date | January 2006 |
| Creators | Renauld, Stéphane |
| Contributors | Chraïbi, Ahmed |
| Publisher | Université de Sherbrooke |
| Source Sets | Université de Sherbrooke |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Mémoire |
| Rights | © Stéphane Renauld |
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