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Établissement d’un nouveau modèle de souris pour étudier les cellules valvulaires interstitielles : ADAMTS19-Cre-ert2

Superviseur : Dr. Piet Van Vliet
Collaborateurs: Dr. Alexandre Dubrac, Dr. Martin Smith / Résumé
INTRODUCTION : Les maladies valvulaires du cœur surviennent dans 2% de la population, impliquant souvent un reflux sanguin dû au rétrécissement de la valve. Nous avons récemment identifié deux familles non apparentées étant atteintes par une sténose aortique. Le séquençage exomique des familles a révélé une mutation entrainant une perte de fonction homozygote pour le gène ADAMTS19. La relation entre la perturbation du gène ADAMTS19 et la sténose a été reproduite et donc confirmée grâce à une souris ADAMTS19-LACZ KO/KO. Cette souris montre également que ADAMTS19 est spécifiquement exprimé dans les cellules valvulaires interstitielles (VICs) dans les valves. Le rôle d’ADAMTS19 durant le développement des valves reste inconnu. Pour analyser le patron d’expression d’ADAMTS19 pendant le développement du cœur, nous avons obtenu un modèle de souris transgénique contenant une CRE-tamoxifen inductible (Cre-ERT2) qui est exprimé sous l’influence du promoteur humain ADAMTS19. HYPOTHESE/OBJECTIF : Nous émettons l’hypothèse que le promoteur humain d’ADAMTS19 inséré dans la souris ADAMTS19-Cre-ERT2 contient toutes les séquences régulatrices permettant d’exprimer le gène ADAMTS19 et que ADAMTS19 est principalement exprimé au niveau des cellules valvulaires interstitielles dans les valves. L’objectif est de caractériser le patron d’expression d’ADAMTS19 en analysant sa distribution durant le développement grâce à une souris reportrice tdTomato. Comme ADAMTS19 est spécifiquement exprimé dans les VICs, cet outil transgénique permettrait d’étudier ces cellules durant le développement. METHODE/RESULTAT : Suite à une étude in silico le promoteur ADAMTS19 est apparu comme extrêmement conservé. Par conséquent, pour analyser l’expression d’ADAMTS19 nous avons obtenu une souris BAC ADAMTS19-Cre-ERT2 contenant la séquence conservée que nous avons croisé avec une souris reportrice tdTomato. Le Tamoxifen est administré aux femelles gestantes par gavage aux jours embryonnaires E9,5, E11,5 ainsi que E13,5, et les cœurs sont extrait a E16,5. Des coupes de cœurs embryonnaires vont permettre d’identifier la localisation et la morphologie des cellules marquées. L’expression d’ADMATS19 dans les cellules valvulaires interstitielles est consistant avec le fait qu’ADAMTS19 est connu pour affecter les valves durant le développent et dans le cas de maladie valvulaire. Cependant, le patron des valves n’est pas reproductible au travers des générations. De plus, nous observons qu’ADAMTS19 est marqué dans des cellules des oreillettes et ventricule dans une lignée et dans une sous population de cellules de l’artère pulmonaire dans une autre. CONCLUSION : L’analyse des séquences de chaque lignée par séquençage permettre d’investiguer la raison de ses différents patrons et de mettre en évidence des régulateurs spécifiques. / BACKGROUND: Valvular heart disease (VHD) occurs in ~2% of the general population, often
resulting in reduced or disturbed blood flow. We recently identified two unrelated families with recessive
inheritance patterns of progressive polyvalvular heart disease in absence of any clear syndromic
phenotype. Exome sequencing revealed homozygous, rare, loss of function (LOF) alleles in both families
for the gene ADAMTS19. The relation between ADAMTS19 mutation and aortic stenosis were confirm via
an ADAMTS19-LacZ KO/KO mouse model. This model also shows that ADAMTS19 is specific of VICs
during valve development. The ADAMTS protein family includes 19 proteases that are involved in matrix
remodeling, and tissue homeostasis in development and disease. However, the role of ADAMTS19
specifically during valve development remains unknown. We aim to characterize ADAMTS19 expression
using a BAC transgenic ADMTS19-CRERT2 mouse. HYPOTHESE/OBJECTIVE We hypothesize that
the BAC used to make the ADMTS19-CRERT2 mouse contains all the regulatory elements to express it
and also that its expression will be specific to the VICs. The objective is to establish the ADAMTS19-
CREERT2 and therefore to create a new tool to study VICs in vivo. METHODS/RESULTS: In silico
analysis of the human and mouse ADAMTS19 genomic regions showed a high level of conservation.
Thus, to analyze ADAMTS19 expression patterns during mouse development, we obtained a BAC
transgenic mouse model containing a tamoxifen inducible Cre (CreERT2) that is expressed under the
influence of the human ADAMTS19 promoter and surrounding genomic region. We crossed males from
several lines created in parallel with Rosa-tdTomato reporter females to generate offspring in which
expression of the fluorescent tdTomato reporter is activated in ADAMTS19-expressing cells upon
tamoxifen administration. Surprisingly, whole mount imaging of embryos induced at E13.5 and isolated
at E16.5 revealed strong, but distinct labelling patterns in offspring from different ADAMTS19CreERT2
sublines. Whereas one line exclusively labelled VICs, consistent with ADAMTS19 in situ RNA
expression data from the Eurexpress database, another line specifically labelled cells in atrial and
ventricular, but not VICs. A third line seems to label only a subset of cells in the pulmonary artery.
Labeling of ADAMTS19-positive VICs is consistent with ADAMTS19 affecting valve development and
VHD. In addition, we observed exclusive ADAMTS19-dependent labelling in atrial and ventricular cells
or in a subset of pulmonary artery cells in two different sublines. CONCLUSION: The distinct expression
patterns in offspring from different ADAMTS19-Cre-ERT2 lines indicates that although regulation of
ADAMTS19 is conserved between human and mouse, expression in VICs versus other cells may be
dependent on mutually exclusive regulatory mechanisms.

Identiferoai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/24467
Date05 1900
CreatorsComes, Johanna
ContributorsAndelfinger, Gregor
Source SetsUniversité de Montréal
Languagefra
Detected LanguageFrench
Typethesis, thèse

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