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Previous issue date: 2013-05-14 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Objetivou-se avaliar sistemas de cultivo propostos para utilização de embriões humanos: sistema de cultivo único e sistema de cultivo sequencial, comparando com sistema de cultivo utilizado nos modelos experimentais bovino e ratas Wistar. Especificamente avaliou-se taxa de clivagem e blastocisto, cinética do desenvolvimento embrionário, quantificação da expressão dos genes em blastocistos bovinos e avaliação da viabilidade e qualidade por morfologia e Tunel de embriões oriundos de ratas Wistar. Para bovinos, complexos cumulus-oócitos foram maturados, fecundados in vitro. No experimento 1 os zigotos foram distribuídos nos sistemas de cultivo: CR2aa, SOFaa, sistema de cultivo seqüencial ECM®/Multiblast® e sistema de cultivo único Global®. Avaliou-se a taxa de clivagem e de blastocisto e expressão dos genes PRDX, HSP70.1, GLUT1 e GLUT5, nos blastocistos. No experimento 2, o cultivo embrionário foi avaliado sobre o desenvolvimento de embriões bovinos biopsiados. Os zigotos foram distribuídos nos sistemas de cultivo: CR2aa, sistema de cultivo seqüencial G1®/G2® e ECM®/Multiblast®, sistema de cultivo único Global®. Para todos os grupos, os embriões 8-16 células foram biopsiados e retornados para cultivo. Avaliou-se taxa de clivagem e de blastocisto. Para ratas Wistar, utilizou-se animais, do Centro de Biologia da Reprodução (CBR/UFJF), com doze semanas de vida, superovuladas com 150 Ul/kg de PMSG e 75 Ul/kg de hCG, intraperitonealmente. No experimento 1 a coleta embrionária procedeu-se 24 horas após o hCG e avaliou-se a viabilidade embrionária No experimento 2 ratas foram distribuídas entre os grupos controle e superovulado e os embriões foram coletados 48 e 72 h após a administração de hCG. Peso dos ovários, número total de estruturas embrionárias e grau de qualidade de embriões foram analisados. No experimento 3 a coleta embrionária procedeu-se 72 h após a administração de hCG. Avaliou-se a qualidade de embriões cultivados in vitro oriundos de ratas superovuladas através da taxa de blastocisto e do índice apoptótico. Já no experimento 4 a coleta dos embriões foi realizada 48h após a administração do hCG. Embriões recuperados foram distribuídos aleatoriamente segundo os grupos: sistema de cultivo sequencial ECM°/Multiblast®, sistema de cultivo único Global®, KSOM. Avaliou-se taxa de blastocisto. A análise estatística foi realizada pelo teste do qui-quadrado, teste de Student, ANOVA e a expressão gênica foi analisada com REST®. No experimento 1 bovino as taxas de clivagem foram semelhantes entre os grupos, mas a taxa de blastocisto total foi menor no sistema sequencial e a taxa de blastocisto expandido foi maior no sistema de cultivo único. Além disso, o cultivo de embriões no sistema único resultou em maior expressão de GLUT1 e GLUT5 (P <0,01) e níveis de expressão semelhantes de HSP70.1 e PRDX1 em comparação com os embriões cultivados em meios sequenciais. No experimento 2 bovino tanto a taxa de clivagem quanto a taxa de blastocisto foi semelhante entre os grupos. Para ratos, no experimento 1 98,2% dos embriões coletados foram considerados viáveis. No experimentos 2 o grupo superovulado apresentou ovários com maior peso e maior número de embriões, comparado com o grupo controle. Entretanto, os embriões do grupo superovulado apresentaram menor número de células 72 horas após a administração de hCG. No experimento 3 a taxa de blastocisto foi de 83,17%, com taxa apoptótica de 10.32 ± 8.91%. No experimento 4 a taxa de blastocisto total foi menor em sistema sequencial (13,6%) quando comparado com KSOM (24,0%) e sistema de cultivo único (32,9%)(p<0.05). Concluiu-se que o cultivo de embriões em meio único é mais favorável em comparação com a de meios sequenciais, a superovulação foi bem sucedida no modelo rato e a técnica de TUNEL se mostrou viável na avaliação da qualidade embrionária de embriões de ratas Wistar. / The objective was to evaluate culture systems proposed to use in human embryos: single culture system and sequential culture system, compared with culture used in experimental model bovine and Wistar rats. Specifically we evaluated the cleavage and blastocyst rate, embryo kinetics, quantification of gene expression in bovine blastocysts and evaluated the viability and quality by morphology and Tunel of embryos derived from female rats. For bovine cumulus-oocyte complexes were matured, fertilized in vitro. In experiment 1 zygotes were distributed in culture systems: CR2aa, SOFaa, sequential culture system ECM®/Multiblast® and single culture system Global®. We evaluated cleavage and blastocyst rate and gene expression PRDX, HSP70.1, GLUT1 and GLUT5 in blastocysts. In experiment 2, the embryo development was evaluated on the development of bovine embryos biopsied. The zygotes were distributed in culture systems: CR2aa, sequential culture system G1e/GZ) and ECM®/Multiblast®, single culture system Global®. For all groups, the 8-16 cells embryos were biopsied and returned to culture. We evaluated cleavage and blastocyst rate. For Wistar rats, we used animals of the Center for Biology of Reproduction (CBR/UFJF), with twelve weeks of life and superovulated with 150IU/kg of PMSG and 75 IU/kg hCG intraperitoneally. In experiment 1 the embryo collection proceeded 24 hours after hCG and we evaluated embryo viability In experiment 2 rats were distributed between the control and superovulated and embryos were collected at 48 and 72 h after hCG administration. Weight of ovaries, the total number of embryonic structures and quality of embryos were analyzed. In experiment 3 embryo collection proceeded to 72 h after hCG administration. We evaluated the quality of embryos cultured in vitro from superovulated rat through the blastocyst rate and apoptotic index. Already in experiment 4 embryo collection was performed 48 h after hCG administration. Embryos recovered were randomized according to the groups: sequential culture system ECM®/Multiblast®, single culture system Global®, KSOM. We evaluated the rate of blastocyst. Statistical analysis was performed using the chi-square test, Student's test, ANOVA and gene expression was analyzed with REST®. In experiment 1 bovine cleavage rate was similar between groups, but the total blastocyst rate was lower in the sequential system and expanded blastocyst rate was higher in single culture system. Furthermore, the embryo cultured in single culture resulted in higher expression of GLUT1 and GLUT5 (P <0.01) and similar expression levels of HSP70.1 and PRDX1 compared to embryos cultured in sequential media. In experiment 2 both cleavage andblastocyst rate was similar between bovine groups. For rats in experiment 1, 98.2% collected embryos were were considered viable. In experiments 2 superovulated group showed ovaries with greater weight and greater number of embryos, compared with control group. However, embryos from superovulated group showed smaller number of cells 72 hours after hCG administration. In experiment 3 the blastocyst rate was 83.17%, with 8.91% ± 10:32 apoptotic rate of. In experiment 4 the total blastocyst rate was lower in sequential system (13.6%) compared to KSOM (24.0%) and single culture system (32.9%) (p <0.05). It was concluded that the culture of embryos in single medium is more favorable than sequential media, superovulation was successful in a rat model and the TUNEL technique proved feasible in evaluating the quality of embryos from embryonic Wistar rats.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/5523 |
| Date | 14 May 2013 |
| Creators | Polisseni, Juliana |
| Contributors | Peters, Vera Maria, Guerra, Martha de Oliveira, Camargo, Luiz Sérgio de Almeida, Serapião, Raquel Varella, Sá, Wanderlei Ferreira de, Araújo, Dimas Augusto Carvalho de |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Programa de Pós-graduação em Saúde Brasileira, UFJF, Brasil, Faculdade de Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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