Orientador : Profª. Drª. Rosangela Locatelli Dittrich / Coorientadora : Prof. Dr. Marcos Vinicius Ferrari / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 23/03/2015 / Inclui referências / Área de concentração : Patologia Veterinária / Resumo: A neosporose e a toxoplasmose são doenças abortivas causadas por protozoários, Neospora caninum e Toxoplasma gondii, respectivamente. Possuem distribuição mundial. A neosporose causa impacto econômico na bovinocultura e a toxoplasmose é uma zoonose. O objetivo do trabalho foi verificar a soroprevalência para N. caninum e T. gondii em touros e isolar os agentes de amostras de sêmen de touros naturalmente infectados. No presente estudo, foram avaliados 108 touros de 14 propriedades localizadas nas mesorregiões Centro-Oriental (seis) e Metropolitana de Curitiba (seis), no Paraná, e mesorregião Serrana de Santa Catarina (duas). Os touros eram de diferentes raças e idades, criados para a reprodução em monta natural. O sangue foi coletado em tubos sem anticoagulante. No soro foi realizada a pesquisa de anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii por reação de imunofluorescência indireta (RIFI, título de 1:50). Comparou-se a soroprevalência e os dados do rebanho: idade, raça, aptidão, presença de aborto, presença de cães livres (N. caninum) e presença de gatos livres (T. gondii), por teste do Qui-Quadrado (p=0,05). Em 15 touros de uma das propriedades foram realizadas, aleatoriamente, coletas pareadas de sangue (tubos sem anticoagulante) e sêmen (eletro ejaculação). No sêmen foi realizada a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) com os primers: Np21/Np6 (N. caninum); TOX4/TOX5 (T. gondii); e ITS2/ITS5 (ambos). Alíquotas de sêmen foram inoculadas em células Vero para o isolamento. Nos isolados do cultivo celular a PCR foi realizada como no sêmen, porém em quatro isolados também foram realizadas a PCR da região NC5-plus (N. caninum) e nested-PCR da região B1 (T. gondii). A soroprevalência foi de 14,8% para N. caninum e 38,9% para T. gondii. Não houve associação de raça, aptidão, idade e presença de hospedeiro definitivo com a soroprevalência para N. caninum ou T. gondii. Houve associação significativa da ocorrência de aborto em propriedades com touros soropositivos para N. caninum. Na PCR as amostras de sêmen foram negativas para N. caninum e para T. gondii. No cultivo celular, quatro amostras apresentaram efeito citopático, taquizoítas e infecção de 90 a 100% da monocamada em 30 a 45 dias. Os quatro isolados foram positivos para N. caninum e T. gondii nas análises da PCR. Pode-se concluir que, na região do estudo, a ocorrência de toxoplasmose em touros é maior que a neosporose. As doenças ocorrem em todas as idades e diferentes raças, independente da aptidão da raça. A ocorrência de neosporose e de toxoplasmose independe da presença do hospedeiro definitivo na propriedade. O aborto é sinal clínico associado com a presença de touros soropositivos para N. caninum. O N. caninum e T. gondii são eliminados viáveis no sêmen de touros naturalmente infectados. Este é o primeiro isolado de N. caninum e T. gondii a partir de sêmen de touros naturalmente infectados. Palavras-chaves: bovino, cultivo celular, PCR, RIFI. / Abstract: The neosporosis and toxoplasmosis are abortive diseases caused by protozoan Neospora caninum and Toxoplasma gondii, respectively. They are distributed worldwide. Neosporosis causes economic impact on cattle and toxoplasmosis is a zoonosis. The aim of this study was to check the seroprevalence of N. caninum and T. gondii infection in bulls and isolate the agents of semen samples from naturally infected bulls. The present study evaluated 108 bulls of 14 properties located in East-Central (six) and Metropolitan of Curitiba (six), Regions of Paraná and Serrana Region of Santa Catarina (two). The bulls were of different races and ages, created for reproduction in natural breeding. Blood was collected in tubes without anticoagulant. In serum, the search of anti-N. caninum and anti-T. gondii antibodies was performed by indirect immunofluorescence assay (IFA, title 1:50). The seroprevalence was compared with herd data: age, race, ability, abortion occurrence, presence of free dogs (N. caninum) and presence of free cats (T. gondii), by chi-square (p=0.05). At the farm, researches conducted randomly paired samples of blood (tubes without anticoagulant) and semen (electroejaculation) in 15 bulls. Polymerase chain reaction (PCR ) was performed in semen with primers: Np21/Np6 (N. caninum); TOX4/TOX5 (T. gondii); and ITS2/ITS5 (both). Aliquots of semen were also inoculated on Vero cells culture for isolation. In culture samples, besides previous primers used in semen, in four samples, researches used a PCR from NC5 region of N. caninum DNA and B1 region of T. gondii DNA. The seroprevalence was 14.8% (16/108) for N. caninum and 38.9% (42/108) for T. gondii. There was no association of race, ability, age or presence of definitive host with the seroprevalence of N. caninum or T. gondii. There was a significant association between the occurrence of abortion in properties with seropositive bulls for N. caninum. Semen samples were negative for N. caninum and T. gondii at PCR. Four samples in cell culture had cytopathic effect, free tachyzoites and 90 to 100% monolayer infected at 30 to 45 days post inoculated. Four cell culture isolates were positive for N. caninum and T. gondii in PCR assays. It can be concluded that, in the regions studied, the occurrence of toxoplasmosis in bulls is greater than neosporosis. Diseases occur in all ages among different races, regardless of race ability. The occurrence of neosporosis and toxoplasmosis is independent of the presence of the definitive host in the farm. Abortion is a clinical sign associated with the presence of seropositive bulls for N. caninum. These results show viable eliminated N. caninum and T. gondii in semen of naturally infected bulls. This is the first isolate of N. caninum and T. gondii from semen of naturally infected bulls. Keywords: bovine, cell culture, PCR, IFA.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/49089 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Busch, Ana Paula Brenner |
| Contributors | Dittrich, Rosangela Locatelli, 1965-, Ferrari, Marcos Vinicius, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 109 f. : il., algumas color., tabs., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível em formato digital |
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