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Previous issue date: 2016-02-23 / Balantidium coli é um protozoário parasito de humanos, primatas não humanos e suínos. A balantidiose é considerada uma zoonose negligenciada e quadros graves da doença geram disenteria podendo levar o hospedeiro ao óbito. Neste contexto, foi propôsto estudar a diversidade de isolados de Balantidium sp. de humanos, suínos e primatas não humanos cativos, no estado do Rio de Janeiro. Entre 2012 a 2015 foram estudadas 790 amostras fecais de suínos, 1115 de primatas não humanos cativos e 114 dos tratadores desses animais. Participaram do estudo nove granjas de suínos e dois criatórios de símios localizados em diferentes municípios desse estado. O material fecal dos suínos foi obtido diretamente da ampola retal, sendo 88 amostras de propriedades familiares e 702 de granjas industriais. Para os símios optou-se por coletar amostrais fecais dos seus recintos, sendo 960 do Cecal/Fiocruz e 155 do CPRJ/INEA. Foram incluídas nesta pesquisa mais de 30 espécies de primatas do Novo Mundo (NM) e duas do Velho Mundo (VM). Os tratadores desses animais foram convidados a participar do estudo e os que aceitaram, receberam um kit de coleta de fezes. As amostras foram submetidas ao exame direto e as técnicas de Faust et al., Lutz, Sheather e Ritchie modificadas. B. coli foi o parasito que apresentou maior frequência, tanto nas granjas familiares, 71,6%, quanto nas granjas industriais, 46,4% dos suínos. Nos primatas do Cecal, B. coli também foi o mais diagnosticado, 47,6%, sendo principalmente detectado no gênero Macaca, enquanto que a frequência do protozoário no CPRJ foi de 3,8%. Nenhuma forma evolutiva de B. coli foi detectada nas amostras dos tratadores. Cistos do parasito foram mais diagnosticados pelo exame direto, 22,4% e pela técnica de Lutz, 21%
O exame direto favoreceu o diagnóstico dessa parasitose, pois também detectou os trofozoítos nas fezes. Amostras que apresentaram no mínimo 10 trofozoítos e/ou 30 cistos de B. coli foram submetidas ao isolamento em meio Pavlova modificado. Foram mantidas 40 cepas do parasito por mais de 30 meses, sendo 30 isoladas de suínos e 10 dos símios Cynomolgus. Foi realizada análise de comportamento cinético nos meios Pavlova, LES e TYSGM9, sob diferentes tempos de incubação em estufa microbiológica. Os trofozoítos apresentavam-se viáveis até 72 horas de incubação nos meios Pavlova modificado e TYSGM-9, sendo que o meio Pavlova mostrou-se mais adequado para a rotina laboratorial devido a seu baixo custo. Cepas em manutenção, assim como mais 34 amostras fecais, que continham cistos do parasito foram submetidas a estudos moleculares a partir da amplificação do fragmento ITS1 \2013 5.8s RNAr \2013 ITS2. O padrão molecular de B. coli foi confirmado em todas as amostras, além de ter sido observado a presença de sequências variantes do tipo A0 em todos os fragmentos analisados. Duas cepas com maior crescimento quantitativo foram escolhidas para estudos morfológicos, uma de suíno e outra de Cynomolgus
Esses foram realizados por meio de conjugados fluorescentes, microscopia eletrônica de varredura e transmissão, que também confirmaram a identidade taxonômica do parasito, além de ter revelado achados ainda não relatados na literatura, onde se destacam parasitos amicronucleados, perfil de microtúbulos e presença de hidrogenossomos/mitocôndrias. Comprovou-se que suínos e primatas não humanos, podem estar parasitados com cepas de B. coli com elevada homogeneidade genética, embora sejam hospedeiros muito distantes filogeneticamente. Esta pesquisa ampliou o arcabouço de informações biológicas, morfológicas e moleculares de Balantidium coli / Balantidium coli is a protozoan parasite of humans, non-human primates and pigs. The
balantidiosis is considered a neglected zoonotic disease and severe cases of the disease
generate dysentery may lead the host to death. In this context, it has been proposed to study
the diversity of Balantidium spp. isolated of human, captives non-human primates and pigs in
the state of Rio de Janeiro. Between 2012 to 2015 were studied 790 stool samples from
pigs,1115 of captive non-human primates and 114 of the caretakers of these animals. The
study included nine pig farms and two breeding centers of macaques located in different
cities of this state. Fecal material from pigs was obtained directly from the rectum, 88
samples of family farms and 702 industrial farms. For apes, were collected fecal samples of
their enclosures, of which 960 came from Cecal/Fiocruz and 155 of CPRJ/INEA. Were
included in this study over 30 species of New World primates (NM) and two Old World (VM).
The caretakers of these animals have been invited to participate and those who accepted,
received a kit to collect stool. The samples were submitted to direct examination and the
techniques of Faust et al., Lutz, Sheather and Ritchie modified. B. coli was the parasite with
the highest frequency, both in family farms, 71.6%, as in industrial farms, 46.4% of pigs. In
primates of the Cecal, B. coli was also the most frequently diagnosed, 47.6%, which is
mainly detected in the genus Macaca, whereas the frequency of the protozoa in CPRJ was
3.8%. No evolutionary form of B. coli was detected in the samples of the caretakers of these
animals. Cysts of the parasite were more frequently diagnosed by direct examination, 22.4%
and by Lutz technique, 21%. Direct examination favored the diagnosis of this parasitosis, it
also detected the trophozoites in the stool. Samples with at least 10 trophozoites and/or 30
cysts of B. coli were subjected to isolation on Pavlova modified medium. 40 strains were held
of the parasite for more than 30 months, these 30 were isolated from pigs and 10 of
Cynomolgus macaques. Kinetics analysis was performed in media Pavlova, LES and
TYSGM9 under different incubation times microbiological incubator. Trophozoites had to be
viable up to 72 hours of incubation in media Pavlova modified and TYSGM-9, and the
Pavlova was more suitable for routine laboratory due to its low cost. Strains maintenance as
well as over 34 fecal samples containing parasite cysts were subjected to molecular studies
from the amplification fragment ITS1 - 5.8S rRNA - ITS2. The molecular pattern of B. coli
was confirmed in all the samples, and it was observed the presence of variant sequences of
the A0 type in all the analyzed fragments. Two strains with higher quantitative growth were
chosen for morphological studies, one of the pig and other of Cynomolgus macaques. These
were carried out by means of fluorescent conjugates, scanning electron microscopy and
transmission, which also confirmed the taxonomic identity of the parasite, and has revealed
findings not yet reported in the literature, which features amicronucleated parasites,
microtubule profile and presence of hidrogenossomos/mitochondria. It has been shown that
pigs and non-human primates, may be infected with strains of B. coli with high genetic
homogeneity, although they are phylogenetically very distant hosts. This research has
expanded the informations biological, morphological and molecular of Balantidium coli.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13181 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Barbosa, Alynne da Silva |
| Contributors | Costa, Filipe Anibal Carvalho, Lopes, Carlos Wilson Gomes, Pissinatti, Alcides, Bello, Alexandre Ribeiro, Sibajev, Alexander, Amendoeira, Maria Regina Reis, Bastos, Otilio Machado Pereira |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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