Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The first study characterized the expression of MAS receptor and key enzymes for Ang-(1-7)
production, such as, ACE2, NEP and PEP during follicular development. Furthermore, the regulation
of local Ang1-7 system was evaluated after the intrafollicular injection of fulvestrant (an estradiolreceptor
inhibitor) in the dominant follicle. Cows were ovariectomized when the size between the
largest (F1) and the second largest follicle (F2) was not statistically different (Day 2), slightly different
(Day 3), or markedly different (Day 4). The mRNA abundance of genes encoding MAS receptor,
ACE2, NEP and PEP was evaluated in the follicular cells from F1 and F2. The mRNA expression of
MAS receptor was upregulated in the granulosa cells of F2 after the establishment of follicular
deviation (Day 4), while PEP mRNA increased during (Day 3) and after (Day 4) the deviation process.
However, the mRNA expression of ACE2 was upregulated in the granulosa cells of F1 during and after
the deviation process. The mRNA expression of NEP was not regulated in F1 and F2. The MAS
receptor was immunolocated in the granulosa and theca cells of F1 and F2 during follicular deviation.
Moreover, MAS receptor gene expression increased when the F1 was treated with the estrogen
receptor-antagonist in vivo. In conclusion, the expression profile of MAS receptor, ACE2, NEP and
PEP in dominant and subordinate follicles indicated that Ang-(1-7) play a role in the regulation of the
follicular dominance in cattle. A second study was performed to investigate the expression of genes
that control homologous recombination (HR; 53BP1, ATM, RAD50, RAD51, RAD52, BRCA1,
BRCA2 and NBS1), and non-homologous end-joining (NHEJ; KU70, KU80 and DNAPK), DNArepair
pathways in bovine embryos with high, intermediate or low developmental competence. We
also evaluated whether bovine embryos can respond to DNA double-stranded breaks (DSBs) induced
by ultraviolet (UV) irradiation by regulating the expression of genes involved in the HR and NHEJ
repair pathways. Embryos with high, intermediate or low developmental competence were selected
based on the cleavage time after in vitro fertilization and were removed from in vitro culture before
(36 h), during (72 h) and after (96 h) the expected period of embryonic genome activation (EGA). All
studied genes were expressed before, during and after the EGA period regardless the developmental
competence of the embryos. Higher mRNA expression of 53BP1 and RAD52 was found before EGA
in embryos with low developmental competence. Expression of 53BP1, RAD51 and KU70 was
downregulated at 72 h and upregulated at 168 h post-fertilization in bovine embryos with DSBs
induced by UV irradiation. In conclusion, important genes controlling HR and NHEJ repair pathways
are expressed in bovine embryos before, during or after EGA. Lower developmental competence
seems to be associated with a higher mRNA expression of 53BP1 and RAD52. Bovine embryos can
response to UV-induced DSBs after the EGA but HR and NHEJ repair pathways seem to be
particularly regulated at the blastocyst stage. / O primeiro estudo caracterizou a expressão do receptor MAS e de enzimas responsáveis pela
produção de Ang-(1-7), tais como, enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2), endopeptidase neutra
(NEP) e prolil endopeptidase (PEP) durante o desenvolvimento folicular. Além disso, a regulação
local do sistema Ang-(1-7) foi avaliada após a injeção intrafolicular de fulvestrant (inibidor do
receptor de estradiol) no folículo dominante. As vacas foram ovariectomizadas quando o tamanho
entre o maior (F1) e o segundo maior folículo (F2) não era estatisticamente diferente (D2),
ligeiramente (D3) ou marcadamente diferente (D4). A expressão de RNAm do receptor MAS, ACE2,
NEP e PEP foi avaliada nas células foliculares do F1 e F2. O receptor MAS foi mais expresso nas
células da granulosa do F2 após o estabelecimento da divergência folicular (D4), enquanto a expressão
de PEP aumentou durante (D3) e após (D4) o processo de divergência. Entretanto, a expressão de
ACE2 foi maior nas células da granulosa do F1 durante e após a divergência. A expressão de PEP não
foi regulada no F1 e F2. O receptor MAS foi imunolocalizado nas células da teca e granulosa do F1 e
F2 durante a divergência folicular. A expressão de RNAm do receptor MAS aumentou quando o F1
foi tratado com fulvestrant in vivo. Em conclusão, o perfil de expressão do receptor MAS, ACE2, NEP
e PEP nos folículos dominante e subordinado indicam que a Ang-(1-7) apresenta uma função na
regulação da dominância folicular em bovinos. Em um segundo estudo investigamos a expressão de
genes que controlam o reparo do DNA através das vias de recombinação homóloga (HR; 53BP1,
ATM, RAD50, RAD51, RAD52, BRCA1, BRCA2, NBS1) e união terminal não homóloga (NHEJ;
KU70, KU80, DNAPK) em embriões bovinos com alta, média ou baixa competência de
desenvolvimento. Foi também avaliado se embriões bovinos podem responder a quebra na fita dupla
de DNA (DSBs), induzida por irradiação UV, através da regulação de genes envolvidos nas vias de
reparo HR e NHEJ. Embriões com alta, média ou baixa competência de desenvolvimento foram
selecionados pelo tempo de clivagem após a fertilização in vitro e foram removidos do cultivo antes
(36 h), durante (72 h) ou após (96 h) o momento esperado para a ativação do genoma embrionário
(AGE). Todos os genes foram expressos antes, durante e após a AGE independentemente da
competência de desenvolvimento dos embriões. A expressão de 53BP1 e RAD52 foi maior antes da
AGE em embriões com baixa competência de desenvolvimento. A expressão de 53BP1, RAD51 e
KU70 foi mais baixa as 72 h e maior as 168 h pós fertilização em embriões com DSBs induzida por
irradiação UV. Em conclusão, genes importantes para o controle das vias de reparo HR e NHEJ são
expressos em embriões bovinos independentemente do tempo de cultivo ou da competência de
desenvolvimento. A menor competência de desenvolvimento embrionário parece estar associada com
maior expressão de 53BP1 e RAD52. Os embriões bovinos respondem a DSBs após a AGE mas as
vias HR e NHEJ são reguladas principalmente no estágio de blastocisto.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/4061 |
| Date | 24 February 2012 |
| Creators | Barreta, Marcos Henrique |
| Contributors | Gonçalves, Paulo Bayard Dias, Mezzalira, Alceu, Barreto, Katia Padilha, Henkes, Luiz Ernani, Portela Junior, Valério Valdetar Marques |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 300, 300, 300, 500, 300, 300, 39e380be-dcb6-45dc-96d0-ad18ba64f2b3, b2567b7e-04a0-4370-ba95-671c12abbeda, f6687207-7d57-473d-9743-de391de747aa, 7d233f19-66ff-4aca-a9fc-784eddf6b946, 928eda97-140f-4f1a-8224-1ee1d957b438, 9b77b75b-3739-4c3b-94bd-d534896df2b7 |
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