Grado de doctor en ciencias biomédicas. / La Esclerosis Múltiple (EM) es una enfermedad autoinmune y crónica que afecta
al sistema nervioso central (SNC), caracterizada por una pérdida de la de tolerancia
inmunológica, que incluye la inactivación funcional de los linfocitos T reguladores (Tregs).
Estudios recientes han descrito diversos mecanismos por los cuales el Interferón (IFN)-
γ, una citoquina conocida clásicamente como inflamatoria, posee efectos reguladores y
protectores en el modelo animal de la EM, la Encefalomielitis Autoinmune Experimental
(EAE). Resultados previos de nuestro laboratorio han mostrado que el tratamiento in vivo
con IFN-γ en la fase crónica de la EAE induce una mejoría significativa de los síntomas,
asociado con un aumento significativo de linfocitos Tregs en el SNC de los animales. En
esta tesis, se investigó los mecanismos por los cuales IFN-γ induce dicho aumento de
linfocitos Tregs supresores de la EAE. Los resultados obtenidos mostraron que la depleción de células expresando FOXP3
antagonizó los efectos protectores de IFN-γ, corroborando que el efecto terapéutico de
esta citoquina es dependiente de los linfocitos Tregs. Ensayos realizados in vitro con
linfocitos T CD4+CD25- provenientes de ratones con EAE, revelaron que IFN-γ no ejerce
un efecto directo sobre la inducción ni funcionalidad de linfocitos Tregs. Además, se
determinó que IFN-γ inhibe la expresión de FOXP3+ en condiciones de diferenciación de
linfocitos Tregs inducibles (TGF-b + IL-2). Tampoco se observó un efecto directo de IFN-
γ sobre la expresión de moléculas reguladoras, expresión de FOXP3+ o funcionalidad
de linfocitos Tregs obtenidos de ratones con EAE. La administración in vivo conjunta de IFN-γ y anticuerpos neutralizantes contra IL-10,
TGF-b o PD-1, mostró que el efecto terapéutico de IFN-γ en la fase crónica de la EAE
depende de TGF-b y de la vía PD-1/PD-Ls, pero no así de IL-10. Análisis de la expresión
de moléculas regulatorias en diferentes subpoblaciones celulares provenientes de
ratones con EAE, determinó que IFN-γ indujo un incremento en la expresión de TGF-b y
PD-L1 en diferentes subgrupos de células CD11b+ (células presentadoras de antígeno)
y de TGF-b en linfocitos T CD8+. Además, se encontró que células CD11b+ estimuladas
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con IFN-γ in vivo o in vitro son capaces de inducir, de manera dependiente de TGF-b y
PD-L1, un aumento en la frecuencia de linfocitos Tregs a partir de linfocitos T CD4+ naïve
provenientes de animales sanos (sin EAE) wild type o 2D2 (expresando un TCR
específico para el péptido de mielina).
En resumen, el conjunto de los resultados obtenidos en esta tesis revela que los efectos
benéficos de IFN-γ en la fase crónica de la EAE se deben a un aumento de linfocitos
Tregs en el SNC mediado por la expresión de FOXP3, TGF-b y la vía PD-1/PD-Ls, y
asociado a un aumento en la expresión de TGF-b y PD-L1 en células CD11b+ y de TGFb
en linfocitos T CD8+. / Multiple sclerosis (MS) is a chronic autoimmune disease affecting the central
nervous system (CNS), characterized by a lost of immune tolerance, that includes a
functional inactivation of regulatory T lymphocytes (Tregs). Recent studies have
described different mechanisms by which Interferon (IFN)-γ, known classically as a proinflammatory
cytokine, has regulatory and protective effects in the animal model of MS,
the Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE). Previous results of our
laboratory have shown that in vivo treatment with IFN-γ during the chronic phase of EAE
induced a significant amelioration of symptoms, associated with a significant increase of
Tregs lymphocytes in the SNC of these mice. In this thesis, the mechanisms by which
IFN-γ induced the increase of Tregs suppressing EAE was investigated. The results obtained shown that depletion of cells expressing FOXP3 suppressed the
protective effects of IFN-γ, supporting the notion that the therapeutic effect of this cytokine
is Tregs-dependent. Assays performed in vitro with T CD4+CD25- lymphocytes obtained
from EAE mice revealed that IFN-γ did not exert a direct effect on the induction or
functionality of Tregs. In addition, IFN-γ inhibited FOXP3 expression in conditions of
iTregs differentiation (TGF-b + IL-2). Likewise, IFN-γ did not affect the expression of
regulatory molecules, FOXP3 expression, or functionality of Tregs obtained from EAE
mice. The in vivo combined administration of IFN-γ and neutralizing antibodies against IL-10,
TGF-b or PD-1, showed that the protective effect of IFN-γ in the chronic phase of EAE
depends of TGF-b or PD-1/PD-Ls pathway, but not on IL-10. Analysis of regulatory
molecules expression in different cell subpopulations obtained from EAE mice determined
that IFN-γ induced an increased expression of TGF-b and PD-L1 on different subgroups
of CD11b+ cells (antigen presenting cells) and TGF-b on CD8+ T cells. In addition, it was
found that in vivo and in vitro IFN-γ–stimulated CD11b+ cells were able to induce, in a
TGF-b and PD-L1-dependent manner, an increase of Tregs frequency starting from naïve
T CD4+ cells obtained from healthy (without EAE) wild type or 2D2 (expressing a specific
TCR for myelin peptide)) mice. Overall, all results obtained in this thesis reveal that the beneficial effects of IFN-γ in the
chronic phase of EAE are related with an increase of Tregs in the SNC mediated by the
expression of FOXP3, TGF-b and PD-1/PD-Ls pathway, and associated with an enhance
in the expression of TGF-b and PD-L1on CD11b+ cells and TGF-b on T CD8+ cells.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/153159 |
| Date | January 2017 |
| Creators | Arellano Lorca, Gabriel Alejandro de Jesús |
| Contributors | Naves Pichuante, Rodrigo, Hermoso Ramello, Marcela, Universidad de Chile, Facultad de Medicina, Escuela de Postgrado |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | English |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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