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Previous issue date: 2015-04-23 / CAPES / A frequência de infecções hospitalares por fungos patogênicos tem aumentado substancialmente nas últimas décadas, acarretando altos níveis de mortalidade que atingem até 60% dos óbitos, frequentes em pacientes graves internados em Unidades de Terapia Intensiva. Testes específicos para diagnóstico de septicemia por Candida albicans possuem altos custos e necessitam um longo tempo para a obtenção de resultados. Diante desse quadro e considerando a necessidade da constante busca por alternativas no diagnóstico de septicemias por Candida albicans, nesse trabalho foi desenvolvido e avaliado uma nova plataforma de sensoriamento para um imunossensor óptico, baseado em Ressonância Localizada de Plasmon. Ressonância de Plasmon corresponde a oscilação coletiva dos elétrons de condução em resposta à excitação óptica promovida pela aplicação de um campo eletromagnético externo. A plataforma de sensoriamento corresponde a uma lâmina de vidro com nanopartículas de prata aderidas em sua superfície e funcionalizadas com anticorpos monoclonais anti-candida da classe das imunoglobulinas IgG. As nanopartículas utilizadas foram avaliadas por microscopia eletrônica de transmissão e espectroscopia de absorção, indicando a presença de nanoestruturas com diâmetro médio de 15 nm. Moléculas de cisteamina foram utilizadas como ligantes no processo de funcionalização de anticorpos e glicina foi explorada como bloqueadores dos sítios não funcionalizados da plataforma. Os experimentos com diferentes concentrações de anticorpos foram realizados em quadruplicadas. Foi observado que quando adicionada cisteamina, glicina e anticorpos o pico de ressonância de Plasmon do sistema sofre um deslocamento para a região vermelha do espectro. Verificou-se deslocamentos do pico de Plasmon de até 30 nm. Na avaliação da plataforma como sensor de antígeno de Candida albicans, a detecção de diferentes concentrações de antígeno foi demonstrada. Plataformas de sensoriamento foram imersas em solução de PBS contendo antígenos nas alíquotas de 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL e 300 ng/mL, por um período de 1 hora, seguido de lavagem com água MiliQ. Os resultados mostram a capacidade do sistema em identificar alíquotas maiores que 50 ng/mL de antígeno de Candida albicans, indicando a possibilidade do uso da plataforma desenvolvida como imunossensor para Candida. / The frequency of hospital infections by pathogenic fungi has increased substantially in recent decades, leading to high levels of mortality reaching up to 60% of deaths, common in critically ill patients in intensive care units. Specific tests for the diagnosis of sepsis due to Candida albicans have high cost and require a long time to obtain results. Given this situation and considering the need for constant search for alternatives in the diagnosis of septicemia by Candida albicans, this work was developed and evaluated a new sensing platform for an optical immunosensor based on Resonance Localized Plasmon. Plasmon resonance corresponds to collective oscillation of conduction electrons in response to optical excitation promoted by the application of an external electromagnetic field. The sensing platform corresponds to a glass slide with nanoparticles of silver adhered on its surface and functionalized with monoclonal anti-candida antibodies of the IgG class of immunoglobulins. The nanoparticles used were evaluated by transmission electron microscopy and absorption spectroscopy, indicating the presence of nanostructures with an average diameter of 15 nm. Cysteamine molecules were used as ligands in the antibodies functionalization process and glycine as blockers of non-functionalized sites of the platform. Experiments with different concentrations of antibodies were performed in quadruplicate. It was observed that when added cysteine, glycine peak and antibodies specific Plasmon resonance is shifted to the red region of the spectrum. Peak shifts were found to Plasmon up to 54 nm. In the evaluation of the platform as a Candida albicans antigens sensor different antigen concentrations was demonstrated. The sensing platforms were immersed in PBS solution containing dilutions of antigens in 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL to 300 ng/mL for a period of 1 hour, followed by washing with MilliQ water. The results show the system ability to identify higher dilutions than 50 ng/mL of Candida albicans antigen, indicating the possibility of the use of the platform as developed immunosensor for Candida.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/16155 |
| Date | 23 April 2015 |
| Creators | NEVES, Wendell Wons |
| Contributors | ARAÚJO, Renato Evangelista de |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Engenharia Biomedica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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