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Previous issue date: 2009-08-21 / Bovine estrous cycle activates the pathways of MAPKs (mitogen activated
protein) via oscillation of hypothalamus-pituitary-gonad axis hormones. The objective
of this work was to evaluate in vivo the frequency of expression of active
(phosphorylated) form, of p-MEK 1/2 and p-ERK1/2 in all types of ovarian follicles and
corpora lutea in different phases of the estrous cycle of cattle. Bovine ovaries were
harvested in a local slaughterhouse and the phase of the estrous cycle was
determined, considering seven stages, defined as experimental groups: days 1-3 (n =
2), 4-6 (n = 5), 7-9 (n = 5), 10-12 (n = 3), 13-15 (n = 5), 16-18 (n = 5) and 19-21 (n =
5). After processing, the histological sections were subjected to
immunohistochemistry using antibodies that specifically recognize the phosphorylated
form of MEK 1/2 and ERK 1/2. Histological sections containing corpora lutea were
also subjected to immunohistochemistry with antibodies that recognize p-BCL2 (B cell
phospho lymphoma 2) and COX-2 (COX-2). The frequency of marked follicles was
evaluated for the presence or absence of markup for the two cellular enzymes. The
fragments of the corpus luteum were evaluated according to the scores of intensity for
positive staining of the four antibodies. The frequencies of the markers studied in the
follicles were compared using the chi-square. In preantral follicles, both MEK and
ERK 1/2 showed high levels between 16 to 18 days. In the case of p-MEK, the
greater activation of primordial follicles and primary held from 7 to 9. In secondary
follicles, the less marked for p-MEK occurred in group 4 to 6. Levels of p-ERK began
to rise from 13 to 15 days and subsequently decreased. Comparing the frequencies
of MEK and ERK, there was statistic difference (p <0.0001) in antral follicles
compared to other types of follicles. It was concluded that the intensity of activation of
MAPKs MEK / ERK varies with the phases of the estrous cycle and follicular class
studied. Since the corpora lutea were evaluated by analysis of variance after
transforming the data, it was observed that the proteins studied showed variation in
expression profile, in relation to the development, survival and death of the corpus
luteum. Since COX-2, a precursor of prostaglandin, is capable of activating the
pathways of MEK / ERK 1/2, it reduces the frequency of expression of cell survival factor BCL-2, leading to the corpus luteum at luteolysis. The in vivo evaluation of the
activation profile of MAPKs without the use of hormonal protocols demonstrated the
importance of this enzyme during the physiological reproductive process, raising new
inquiries and providing opportunities to expand knowledge about the functioning of
the hormone and its association with the cellular mechanisms activated by hormones / A ocorrência do ciclo estral bovino, a partir de variações dos hormônios do eixohipotálamo-
hipófise-gônadas, ativa as vias das MAPKs (proteína ativada por
mitógenos) O objetivo desta tese foi avaliar in vivo a freqüência de expressão da
forma ativa (fosforilada), de todos os tipos foliculares ovarianos e corpo lúteo para p-
MEK 1/2 e p-ERK1/2, em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tal, foram
coletados em abatedouros locais ovários de bovinos e determinada a fase do ciclo
estral, caracterizando sete fases, definidas como grupos experimentais: dias 1-3
(n=2), 4-6 (n=5), 7-9 (n=5), 10-12 (n=3), 13-15 (n=5), 16-18 (n=5) e 19-21 (n=5).
Após o processamento histológico os cortes foram submetidos à imunoistoquímica,
utilizando anticorpos que reconhecem especificamente a forma fosforilada da MEK
1/2 e ERK 1/2. Cortes histológico que apresentavam corpos lúteos foram submetidos
ainda a imunoistoquímica com anticorpos que reconhecem p-BCL2 (fosfo células B
de linfoma 2) e COX-2 (ciclooxigenase 2). As freqüências de folículos marcados
foram avaliadas em relação à presença ou não de marcação celular para as duas
enzimas. Já os fragmentos de corpo lúteo foram avaliados de acordo com escores de
intensidade de marcação para os quatro anticorpos. As freqüências das marcações
nos folículos estudados foram comparadas por meio do teste qui-quadrado. Em
folículos pré-antrais, tanto a MEK quanto a ERK 1/2 apresentaram níveis elevados
entre os dias 16 a 18. No caso da p-MEK, a maior ativação dos folículos primordiais
e primários ocorreu entre os dias 7 a 9. Em folículos secundários, a menor presença
de folículos marcados para p-MEK ocorreu no grupo 4 a 6. Os níveis de p-ERK
começaram a se elevar a partir de 13 a 15 dias, e posteriormente diminuíram.
Quando comparadas as freqüências de MEK e ERK, foram registradas diferenças
(p<0,0001) nos folículos antrais em comparação aos demais tipos foliculares.
Concluiu-se que a intensidade de ativação das MAPKs MEK/ERK varia de acordo
com as fases do ciclo estral e com a classe folicular estudada. Já os corpos lúteos
foram avaliados por meio de análise de variância, após transformação dos dados, na
qual foi observada que as proteínas estudadas apresentam variação no perfil de expressão, estando relacionada com o desenvolvimento, sobrevivência e morte do
corpo lúteo. Sendo que o COX-2, um precursor da prostaglandina, tem capacidade
de ativar as vias das MEK/ERK 1/2, diminuindo a freqüência de expressão do fator
de sobrevivência celular BCL-2, levando o corpo lúteo ao momento da luteólise.
Assim a avaliação do perfil de ativação das MAPKs in vivo, sem a utilização de
protocolos hormonais, demonstrou a importância desta via enzimática durante o
processo fisiológico reprodutivo, abrindo espaço para futuras indagações e
possibilidades de ampliação de conhecimento a cerca do funcionamento hormonal e
sua associação com os mecanismos celulares ativados pelos hormônios
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tde/1194 |
| Date | 21 August 2009 |
| Creators | FERREIRA, Mônica Rodrigues |
| Contributors | ARAÚJO, Eugênio Gonçalves de, KIPNIS, Ana Paula Junqueira |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Doutorado em Ciência Animal, UFG, BR, Ciências Agrárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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