Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2006-2007 / Le facteur de transcription GATA4 joue un rôle majeur dans le développement du cœur, du système digestif et des gonades. Bien qu'un grand nombre de gènes cibles de GATA4 soit connu, les mécanismes qui régulent sa propre expression restent à définir. Afin de mieux comprendre la régulation de G AT A4 dans les gonades, un fragment de 5 kb situé en amont de l'exon 1 du gène Gata4 de rat a été clone et inséré devant le gène rapporteur luciferase. Des expériences de transfections transitoires dans des lignées gonadiques (MA-10, MSC-1, DC3) et hétérologue (CV-1) ont révélé que l'activité basale du promoteur Gata4 était assurée par une courte région d'ADN de 118 pb en amont de l'exon 1. Une étude in silico comparant les séquences orthologues de cette région a permis d'identifier plusieurs éléments « cis » conservés. Une mutagenèse de ces sites a démontré qu'un élément E-box était crucial pour l'activité basale du promoteur Gata4. Des essais de retardement sur gel ont mis en évidence la liaison de la E-box par les facteurs de transcription ubiquitaires USF1 et USF2. Cette étude décrit pour la première fois les éléments de régulation basale requis pour la transcription du gène G AT A4. / The GATA4 transcription factor plays a major role in the development of the heart, the gut and gonads. Although many target genes regulated by GATA4 have been identified, surprisingly little is known about the factors and the mechanisms implicated in the regulation of the GATA4 gene itself. In order to better understand how GATA4 expression is controlled in the gonads, 5 kb of the region immediately upstream of exon 1 of the rat Gata4 gene have been cloned and placed upstream of a firefly luciferase reporter. Transient transfection assays in both homologous (MA-10, MSC-1 and DC3) and heterologous (CV-1) cell lines revealed that the first 118 bp were sufficient to drive full promoter activity. Comparative sequence analysis revealed the presence of multiple conserved cisregulatory elements located within this minimal promoter region. Site-directed mutation of these sites identified an E-box as the crucial element required for the basal activity of the Gata4 promoter. Subsequent gelshift assays showed that the E-box was bound by the ubiquitous transcription factors USF1 and USF2. Therefore, this study provides the first description of the regulatory sequences required for GATA4 transcription.
Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/18840 |
Date | 12 April 2018 |
Creators | Tétu, Amélie |
Contributors | Viger, Robert S. |
Source Sets | Université Laval |
Language | French |
Detected Language | French |
Type | mémoire de maîtrise, COAR1_1::Texte::Thèse::Mémoire de maîtrise |
Format | xii, 124 f., application/pdf |
Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
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