O objetivo deste estudo foi investigar in vitro a influência do tratamento de superfícies radiculares na adesão e proliferação de fibroblastos gengivais e de ligamento periodontal humano em fragmentos radiculares de dentes humanos extraídos por razões periodontais. Todos os fragmentos receberam raspagem e alisamento radicular (RAR), e em seguida aleatoriamente divididos em grupos, de acordo com a substância utilizada no tratamento de superfície (n= 15/grupo): ácido fosfórico 37% aplicado por 90s (AF90) ou 180s (AF180) (RAR); EDTA 24% aplicado por 90s (EDTA90) ou 180s (EDTA180); ácido cítrico pH 1.0 a 10% aplicado por 90s (AC90) ou 180s (AC180); ácido cítrico pH 1.0 a 10% associado à tetraciclina 50% por 90s (ACTC90) ou 180s (ACTC180); tetraciclina hidroclorídrica (50mg/ml) aplicada por 90s (TC90) ou 180s (TC180). O grupo controle foi composto por fragmentos tratados por meio de RAR seguido de lavagem em soro fisiológico. Após a realização dos tratamentos, os espécimes (n=3/grupo) foram preparados para análise em MEV com o objetivo de avaliar a descontaminação das superfícies radiculares por meio dos índices de rugosidade superficial (IRS), cálculo residual (ICR), perda de substância dentária (IPSD), presença de restos teciduais (IPRT), remoção de smear layer (IRSL), abertura dos túbulos dentinário (ATD) e smear layer remanescente (SLR) em fotomicrografias em aumentos de 500x e 1000x. Em 6 espécimes de cada grupo, foram plaqueados 104 fibroblastos gengivais (FGH-1), e em outros 6, 104 fibroblastos de ligamento periodontal humano (FLP-1). Após 24h foram fixados 6 espécimes por grupo (n=3/grupo) e após 48h os outros 6 espécimes (n=3/grupo), para análise em microscópio eletrônico de varredura. Para determinar a adesão e proliferação celular, o número de células aderidas à superfície nos dois períodos de avaliação foi determinado em triplicatas por um examinador independente A comparação entre os grupos foi realizada pelo método Kruskal-Wallis complementado pelo teste de Dunn para variáveis não lineares, e por meio de análise de variância múltipla (ANOVA) complementado pelo teste de Tukey para as variáveis lineares. A comparação entre os pares nos períodos de 24 e 48 horas foi realizada por meio do método ANOVA pósteste Sidak para variáveis lineares, e Kruskal Wallis pós-teste Dunn para variáveis não lineares. Foi adotado nível de significância de 5% em todos os testes. Não houve diferença estatisticamente significante para IRS, IPSD, IPRT, IRSL, ATD e SLR. Houve maior quantidade de cálculo residual nos grupos TC90 (3,66 ± 0,57; mediana = 4) e AF180 (3,66 ± 0,57; mediana = 4), enquanto que o grupo AC90 (1,33 ± 0,57; mediana = 1) mostrou quantidade significativamente menor de cálculo residual. Encontrou-se uma adesão significativamente maior de células FGH-1, no grupo EDTA180 (170 ± 77,99) no período de 24 horas, e maior efeito proliferativo (48 horas) no grupo TC90 (172,90 ± 65,38). Para células FLP-1, observou-se uma adesão significativamente maior no grupo ACTC90 (74,67 ± 98,84) no período de 24 horas e maior efeito proliferativo (48 horas) no grupo AC90 (173,8 ± 139,6). A partir dos resultados obtidos, sugere-se que a substância a ser utilizada para o condicionamento das superfícies radiculares seja escolhida de acordo com os objetivos do tratamento periodontal: quando se objetiva a formação de nova inserção conjuntiva o uso do EDTA ou AF por 180s ou da tetraciclina por 90s; para regeneração dos tecidos periodontais, sugere-se o uso de AC por 90s. / The aim of this study was to evaluate in vitro the influence of root surface conditioning on adhesion and proliferation of gingival and periodontal ligament fibroblasts on human root fragments of teeth extracted for periodontal reasons. Fragments received scaling and root planning (SRP), and were then randomly allocated into groups according to the substance used for root surface treatment (n= 15/grupo): phosphoric acid 37% applied for 90s (PA90) or 180s (PA180); EDTA 24% applied for 90s (EDTA90) or 180s (EDTA180); 10% citric acid pH 1.0 applied for 90s (CA90) or 180s (CA180); 10% citric acid pH 1.0 associated to tetracycline HCL 50% applied for 90s (CATC90) or 180s (CATC180); tetracycline hydrocloride (50mg/ml) applied for 90s (TC90) or 180s (TC180). Control group was composed by SRP treated root fragments, followed by saline solution washing. After treatment completion, specimens (n=3/grupo) were prepared for scanning electronmicroscopy (SEM) analysis, aiming at evaluation of its surfaces according to the following indexes: superficial roughness (SR); residual calculus (RC); loss of tooth substance (LT); tissue residual (TS), smear layer removal (SLR), dentin tubules opening (DTO) and smear layer residual (SLR) in photomicrographs on 500x and 1000x magnifications. In 6 specimens of each group 104 gingival fibroblasts (HGF-1) were plated; and over another 6 specimens, 104 periodontal ligament fibroblasts (PLF-1). After MEV evaluation, the number of cells adhered to the root surfaces over 24h and 48h were assessed by a calibrated examiner in triplicates. Groups comparison were analyzed through Kruskal-Wallis post-test Dunn for comparisons for non-linear variables, and ANOVA post-test Tuckey for linear variables. Comparison between pairs over 24 and 48 hours was accessed through Kruskal-Wallis post-test Dunn for non-linear variables, and ANOVA post-test Sidak for linear variables. Significance level of 5% was adopted in all tests. There was no statistical difference for SR, LT, TS, SLR, DTO and SLR. Although there was higher amounts of residual calculus on groups TC90 (3,66 ± 0,57; median = 4) and FA180 (3,66 ± 0,57; median = 4) while group CA90 (1,33 ± 0,57; median = 1) showed statistically less residual calculus. A singnificantlly higher HGF-1 cell count was found on EDTA180 (170 ± 77,99) on 24-hour period and a higher proliferative effect (48 hours) on group TTC90 (172,90 ± 65,38). A significantly higher cell adhesion for (PLF-1) was found on group ACTC90 (74,67 ± 98,84) at 24-hour assessment, and higher proliferative effect (48 hours) for AC90 (173,8 ± 139,6). From the data here exposed, it is suggested that the substance election for root surface conditioning should be based on the treatment primary goal: when a new connective tissue adhesion is aimed, EDTA or PA for 180s or TTC for 90s should be chosen; on the other hand, for periodontal regeneration, CA for 90s should be the best option.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-13072018-095900 |
| Date | 09 March 2018 |
| Creators | Veronesi, Giovana Fuzeto |
| Contributors | Sant Ana, Adriana Campos Passanezi |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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