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Previous issue date: 2017-02-17 / FACEPE / Lectinas são proteínas capazes de formar ligação com carboidratos de forma reversível. Os anticorpos ou imunoglobulinas (Ig) também de origem proteica, são gerados pelo sistema imune, e possuem elevado padrão de especificidade aos antígenos. Quando purificados e imobilizados servem como reagentes em diagnósticos de contaminantes químicos e biológicos, além disso quando desenvolvidos contra lectinas são capazes de reconhecer proteínas homólogas. Este trabalho teve como objetivo empregar um protocolo simplificado para a purificação da lectina coagulante de sementes de Moringa oleifera (cMoL), avaliar seu potencial antimicrobiano bem como desenvolver anticorpo contra a lectina. A caracterização parcial foi efetuada através de eletroforeses para proteínas nativas, bem como eletroforese contendo sulfato sódico de dodecila (SDS-PAGE) na presença de agente redutor. A purificação de cMoL com gel de guar produzido pelo protocolo desenvolvido neste trabalho foi eficiente; a atividade hemaglutinante específica (AHE) da lectina foi de 2.500. De acordo com a eletroforese a proteína purificada é básica e possui o mesmo padrão de massa molecular da cMoL anteriormente obtida por gel de guar utilizando protocolo previamente descrito. Também foram realizados os seguintes testes de atividade biológica: ensaio hemolítico com o extrato, fração e a lectina purificada da M. oleifera, preparações que não apresentaram hemólise das hemácias em todas as concentrações testadas; um ensaio de atividade antibacteriana, com a lectina purificada no qual em concentração de 10 mg/mL, houve inibição do crescimento das espécies Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Serratia sp. e Bacillus subtilis, não houve resultado com a espécie Proteus mirabilis; e efeito bactericida não foi observado para nenhuma linhagem. cMoL inibiu as espécies leveduriformes Candida albicans, C. krusei, C. tropicales e C. glabrata; efeito fungicida foi detectado nas espécies C. albicans e C. tropicales. Um anticorpo policlonal contra a lectina foi desenvolvido e poderá após purificação ser caracterizado e aplicado a imunoensaios. Conclusivamente, a metodologia utilizada poderá servir como base para futuras aplicações de cMoL purificada à homogeneidade. A lectina não promove efeito hemolítico em eritrócitos humanos do sangue tipo O. Os ensaios antimicrobianos revelaram maior toxicidade para os fungos comparados às bactérias. Os resultados da imunodifusão foram positivos na segunda inoculação ocorrendo precipitação entre IgG, extrato e lectina demonstrando que cMoL é imunogênica. / Lectins are proteins that can form carbohydrate binding reversibly. Antibodies or immunoglobulins (Ig) also of protein origin, are generated by the immune system, and have a high specificity to the antigens. When purified and immobilized they serve as reagents in diagnostics of chemical and biological contaminants, furthermore when developed against lectins they are able to recognize homologous proteins. The objective of this work was to employ a simplified protocol for the purification of Moringa oleifera seed coagulant lectin (cMoL), to evaluate its antimicrobial potential as well as to develop antibody against the lectin. Partial characterization was performed by electrophoresis for native proteins, as wel as sodium dodecyl sulphate electrophoresis (SDS-PAGE) in the presence of reducing agent. The purification of cMoL with guar gel produced by the protocol developed in this work was efficient; The specific hemagglutinating activity (AHE) of the lectin was 2,500. According to the electrophoresis the purified protein is basic and has the same molecular mass standard of cMoL previously obtained by guar gel using protocol previously described. The following biological activity tests were also performed: hemolytic assay with extract, fraction and purified lectin of M. oleifera, in which all preparations did not show red cell hemolysis at all concentrations tested, an antibacterial activity assay with Purified lectin in which at a concentration of 10 mg / mL, inhibition of the growth of the species Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Serratia sp. And Bacillus subtilis, there was no result with the species Proteus mirabilis; A bactericidal effect was not observed for any one lineage. CMoL inhibited yeast species Candida albicans, C. krusei, C. tropicales and C. glabrata; Fungicidal effect was detected in C. albicans and C. tropicales species. A polyclonal antibody against the lectin has been developed and may after purification be characterized and applied to immunoassays. Conclusion, the methodology used may serve as a basis for future applications of purified cMoL to homogeneity. The lectin does not promote hemolytic effect in human erythrocytes of type O blood. The antimicrobial assays revealed greater toxicity to fungi compared to bacteria. The immunodiffusion results were positive for second inoculation with precipitation occurring between IgG, extract and lectin demonstrating that cMoL is immunogenic.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25243 |
| Date | 17 February 2017 |
| Creators | OLIVEIRA, Benny Ferreira de |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/2944428818449047, COELHO, Luana Cassandra Breitenbach Barroso, PAIVA, Patrícia Maria Guedes |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
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