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Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES / FACEPE / CNPQ / O carcinoma ductal invasivo (CDI) é o tumor maligno de mama mais comum e uma das
principais causas de morte relacionada ao câncer em mulheres no mundo. A alteração no
padrão de glicosilação é uma característica marcante do fenótipo tumoral. Dentre as reações
glicosídicas alteradas no câncer está a fucosilação. Os tetrassacarídeos fucosilados sialil
Lewis X (sLex) e sialil Lewis A (sLea) são ligantes reconhecidos pelas glicoproteínas
transmembrânicas selectinas envolvidos nas interações célula-célula necessárias nos
processos inflamatórios, hemostase/trombose, cicatrização de feridas e metástase tumoral. A
etapa final na síntese do sLex e sLea é realizada pela ação da α1,3/4-fucosiltransferase
(FUT3), enzima codificada pelo gene FUT3. A expressão do sLea em carcinoma mamário está
relacionada ao estágio tumoral e maiores níveis desse antígeno foram encontrados em tumores
metastáticos. Níveis elevados da enzima FUT3 está relacionada ao maior poder metastático
em linhagens celulares de câncer de próstata e pâncreas e sua ação é fundamental para o
mecanismo de transição epitelial-mesenquimal induzido por TGF-β no câncer colorretal.
Apesar da ação pró-tumoral exercida pela enzima FUT3 e seus produtos, estudos vem
demonstrando sua importância para a citotoxicidade mediada pelas células NK sobre células
tumorais, tanto devido ao reconhecimento do antígeno sLex pelos receptores lectina do tipo C
quanto devido a fucosilação dos receptores DR4 e DR5 por essa enzima que é fundamental
para o desencadeamento da via de apoptose extrínseca estimulada pelo Apo2L-TRAIL.
Visando o maior conhecimento do papel dessa enzima no câncer de mama, o presente
trabalho objetivou avaliar os níveis teciduais da FUT3 em tumores mamários malignos
(carcinoma ductal invasivo - CDI) de pacientes do Hospital das Clínicas da UFPE (HCUFPE)
e do Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), investigando
se há correlação entre a expressão enzimática com a malignidade tumoral e o risco de
metástase. A genotipagem da região promotora do gene FUT3 também foi realizada a fim de
identificar possíveis SNPs relacionados à expressão dessa enzima. Para tal biópsias em
parafina de carcinoma ductal invasivo (CDI) foram selecionadas no arquivo do Setor de
Anatomia Patológica do HC-UFPE e do IMIP. Os níveis teciduais da FUT3 foram avaliados
por imuno-histoquímica. O DNA foi extraído por metodologia adaptada de Ramalho et al.
(2014), a região promotora amplificada por PCR e posteriormente sequenciada pelo método
de Sanger modificado. As sequências obtidas em duplicata foram analisadas através do
software CLC Main Workbench. A análise estatística foi realizada através do teste exato de
Fisher para os dados de expressão e pelo teste de Qui quadrado para a análise genômica,
ambas as análises utilizando o software GraphPad Prism v.5. Nossos resultados
demonstraram que a ausência tecidual da enzima FUT3 está relacionada ao CDI em pacientes
brasileiros, sendo mais freqüente em tumores maiores e negativos para o receptor do fator de
crescimento epidérmico humano 2 (HER2). Análise genômica mostrou que duas variações
localizadas na região promotora do gene FUT3 estão associadas ao CDI, embora o efeito
direto desses polimorfismos na expressão da FUT3 não pode ser avaliada. O alelo T do SNP
rs73920070 (-6933 C> T) está associado a ausência da neoplasia enquanto que o alelo T do
SNP rs2306969 (-6951 C> T) está associado a presença do carcinoma ductal invasivo na
população brasileira. / Invasive ductal carcinoma (IDC) is the most common breast malignant tumor and the
mainly cause of death related to cancer among women in the world. The alteration of
glycosylation pattern is a well established feature of tumor phenotype. Fucosylation is one of
main glycosidic changes in cancer. The fucosylated tetrasacarides sialil Lewis X (sLex) and
sialil Lewis A (sLea) are ligands recognized by the transmembrane glycoproteins selectins
involved in cell-cell interactions during the inflammatory process, hemostasis/thrombosis,
wound healing and tumor metastasis. The final step in sLex and sLea synthesis is done by the
action of α1,3/4-fucosyltransferase (FUT3), enzyme encoded by FUT3 gene. The expression
of sLea in mammary carcinoma is related to tumor stage and higher levels of this antigen were
found in metastatic tumors. Higher protein expression of FUT3 were related to a bigger
metastatic power in prostate and pancreas cancer cell lines and its action is primordial to
epithelial-mesenchymal transition induced by TGF-β in colorectal cancer. Despite the protumoral
action of FUT3 enzyme and its products, studies have shown their importance to NK
cell-mediated citotoxicity against tumor cells, due to the sLex antigen recognition by type C
lectin receptors and due to the fucosylation of DR4 and DR5 receptors, fundamental step to
the extrinsic pathway of apoptosis stimulated by Apo2L-TRAIL. Aiming to better understand
the role of this enzyme in breast cancer, the purpose of this study was evaluate the tissue
protein expression of FUT3 in breast malignancies (invasive ductal carcinoma – IDC) in
patients from Hospital das Clínicas da UFPE (HC-UFPE) and Instituto de Medicina Integral
Professor Fernando Figueira (IMIP). We investigated whether there is correlation between the
FUT3 enzymatic expression with malignancy and metastasis risk in this cancer type. The
genotyping of the FUT3 promoter region was also realized in order to identify SNPs with
potential to interfere on the enzyme expression. IDC formalin-fixed and paraffin-embedded
biopsies were selected from pathological anatomy service from HC-UFPE and IMIP. FUT3
tissue levels were evaluated by immunohistochemistry. DNA was extracted using the adapted
methodology from Ramalho et al. (2014), the promoter region was amplified by PCR and
next sequenced by Sanger modified method. The sequences obtained in duplicate were
analyzed using the CLC Main Workbench software. Statistical analyzes were realized using
Fisher’s exact test for expression data and Qui square test for genomic data. Both analyzes
were conducted using GraphPad Prism software v. 5. Our results demonstrate that the lack of
FUT3 expression in breast tissues is related to the presence of IDC in Brazilian patients. No
expression of FUT3 was more frequent in patients with large neoplastic lesions and tumors
that do not express the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2). Genomic analyzes
showed that two variations localized in FUT3 promoter region are statistically associated to
IDC, however the direct effect of these polymorphisms in FUT3 enzyme expression is still to
be evaluated. The T allele of rs73920070 (-6933 C> T) SNP is associated to the neoplasia
absence while the T allele of rs2306969 (-6951 C> T) SNP is associated to IDC presence in
Brazilian northeastern population.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/18070 |
| Date | 24 February 2015 |
| Creators | NASCIMENTO, Jéssica Catarine Frutuoso do |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/0666418873090095, BELTRÃO, Eduardo Isidoro Carneiro, ROCHA, Cíntia Renata Costa |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Bioquimica e Fisiologia, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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