G protein-coupled receptors (GPCR) are interesting drug targets. In this degree project the focus is on GPR183 and GPR61 which play a role in immune cell trafficking and metabolic regulation respectively. This project aims to test specific mutations from both blood cancer and high obesity samples, with the goal of seeing any different behaviors compared to wild type receptors. Behavior in this case pertains to differences in expression and activation, both constitutively and in the presence of ligands. The project employs a plethora of different physical instruments to obtain these results. The use of Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET), Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) and a combination of multiple different assays together form a robust way of measuring both expression and activation for different mutations. The main takeaways for GPR183 were that the mutation, L125P, found in Non-Hodgkin lymphoma samples, differ significantly in both expression and activation compared to wild type. Specifically at the native membrane domain. There were also results that speculated that this mutation might induce misfold, hindering its transportation to the membrane from the inner compartments of the cell.For GPR61, a majority of the mutations investigated showed lower expression compared to the wild type counterpart, and only a few saw a significant reduction in activation. Ligand experiments on GPR61 did not yield any increase in constitutive activity, prompting further assessment in the future. Overall, the project gained interesting results that prompts further investigation of GPR183 mutations, and signaling, specifically in the realm of G_α signaling. The project also narrows down the large magnitude of GPR61 mutations interesting for further research. This provides a solid foundation into GPCR signaling in said diseases. / G-proteinkopplade receptorer (GPCR) är intressanta läkemedelsmål. I detta examensarbete ligger huvudfokus på GPR183 och GPR61 som spelar varsin roll i trafikering av immunceller respektive metabolisk reglering.Detta projekt syftar till att testa specifika mutationer från prover kopplade till blodcancer och hög fetma med målet att se olika beteenden jämfört med vildtyp. Beteende i detta fall hänför sig till skillnader i uttryck och aktivering, både konstitutivt och med närvaro av ligander.Projektet använder en uppsjö av olika fysiska instrument för att få dessa resultat. Användningen av Bioluminescensresonasenergiöverföring (BRET), fluorescensenergiöverföring (FRET) och en kombination av flera andra metoder, bildar de tillsammans ett robust sätt att mäta både uttryck och aktivering för olika mutationer.De viktigaste för GPR183 var att mutationen, L125P, som hittades i non-Hodgkin-lymfom prover, skiljer sig signifikant i både uttryck och aktivering jämfört med vildtyp. Specifikt vid den naturliga membrandomänen. Det fanns också resultat som spekulerade i att denna mutation kan inducera felveckning, vilket hindrar dess transport till membranet från cellens inre avdelningar.För GPR61 visade en majoritet av de undersökta mutanterna lägre uttryck jämfört med vildtypens motsvarighet och endast ett fåtal såg en signifikant minskning av aktivering. Ligandexperiment på GPR61 gav ingen ökning av konstitutiv aktivitet, vilket föranleder till ytterligare bedömningar i framtida experiment.Sammantaget fick projektet intressanta resultat som föranleder ytterligare undersökning av GPR183-mutationer och deras beteenden, särskilt kopplat till G_α signalering. Projektet begränsar också den stora mängden GPR61-mutanter som är intressanta för vidare forskning. Detta ger en solid grund för GPCR-signalering i nämnda sjukdomar.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-347856 |
| Date | January 2024 |
| Creators | De Rosa, Alexander |
| Publisher | KTH, Tillämpad fysik |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | TRITA-SCI-GRU ; 2024:055 |
Page generated in 0.0018 seconds