The embryonic development and pregnancy rates are influenced by
variations in embryo in vitro production (IVP) systems and protocols for bovine
embryos, such as gaseous atmosphere, culture media and the protein supply
adopted in the different steps of IVP. Two studies were performed to evaluate the
effect of O2 tension on in vitro maturation (IVM) and fertilization (IVF) of bovine
oocytes, and the protein supply in the embryonic in vitro culture. Immature Cumulusoocytes
complexes (COC) were recovered by transvaginal ultrasound guided
follicular aspiration (OPU) from Bos taurus indicus donors from commercial programs
and randomly assigned according to the number and quality of the COC. Standard
bovine IVM procedure was carried out in modified TCM-199, added of FSH, LH,
Oestradiol, EGF, insulin and 10% bovine fetal serum (FCS), for 24h. Frozen semen
was selected by Percoll gradient (90, 60 and 30%). The insemination was performed
with 2x106 spermatozoa/mL in Fert-Talp with heparin and PHE, for 18 to 22h.
Presumptive zygotes were in vitro cultured (IVC) in SOFaaci during 6 to 9 days with
5%CO2, 5%O2 and 90% N2 in air. All steps of IVC were performed in an incubator at
39ºC with satured humidity. The cleavage and blastocyst rates were analysed by
GLM procedure. Hatching, quality I blastocyst and pregnancy rates were compared
by Chi-square Test with 5% of significance. In experiment I (11 replicates) IVM and
IVF of COC (n=1092) were conducted under 5% CO2 (20% O2) in air or in 5%CO2,
5%O2 and 90% N2 (5%O2). Experiment II was divided in two steps (IIa and IIb). In
experiment IIa (n=1745 COC), the IVM and IVF was followed by in vitro culture (IVC)
in SOFaaci added of 4mg/mL bovine serum albumin (BSA) or 4mg/mL BSA+2%
bovine fetal serum (BSA+FCS). In experiment IIb (n=704 COC), after standard IVM
and IVF, IVC was performed in the two media of Experiment IIa (BSA and BSA+FCS) and in a third group the SOFaaci was added of 4mg/mL BSA+2% FCS
(BSA+FCSD4) on day 4 of IVC. The viability was accessed by morphological
evaluation in D2 (cleavage), D7 (blastocysts and quality categories), D9 (hatched
blastocysts), D45 (experiment I) and D60 (experiment II; pregnancy rates),
considering day zero (D0) as the fertilization day. In experiment I, no differences
were found (P>0.05) in cleavage rates (69 and 70%), blastocyst in D7 (37 and 38%)
and blastocyst quality I (79 and 74%) in an atmosphere of 5% or 20%O2,
respectively. The hatching rate in D9 considering all COC submitted to IVM was
higher (P<0.05) for the 5%O2 group (21%) compared to the IVM and IVF group under
20%O2 (11%). A pregnancy rate of transferred embryos at 45 days (n=278) was
similar (P=0.15) between treatments (25.8 e 33.6% for 5%O2 e 20%O2 ,respectively ).
In experiment IIa blastocyst rates (51%) and quality I blastocysts (41%) in D7, was
higher (P<0.05) in BSA+FCS group compared to the BSA group (42 and 30%),
respectively. In experiment IIb, blastocyst rates were higher (P<0.05) in group
BSA+FCS (47%) and similar between BSA (34%) and BSA+FCSD4 (43%) groups.
Blastocyst rates quality I were higher (P<0.05) for groups BSA+FCS (34%) and
BSA+FCSD4 (32%), compared to the BSA group (19.9%). A pregnancy rate of the
transferred embryos (n=820) was similar between treatments in experiments IIa and
IIb. Considering pregnancy rates corresponding only to IVM COC (Experiment IIa),
the rates were higher (P<0.05) for the BSA+FCS group (16%) than the BSA group
(12%). There was no detrimental effect in IVP of bovine embryos and their pregnancy
rates when IVM, IVF and IVC were performed in 5%O2, 5%CO2 and 90%N2. IVP of
bovine embryos is increased by the addition of 2% FCS to the IVC medium without
any detrimental effect on their morphological quality and pregnancy rates. On the
other hand, pregnancy rates related to IVM of COC incremented by the addition of
2% de Fc to the IVC medium SOFaaci+BSA. / Diferenças nos protocolos e sistemas de produção in vitro (PIV) de embriões bovinos
incluindo atmosfera gasosa, meios de cultivo e suplementação de proteína utilizados
nas diferentes etapas da PIV, influenciam diretamente os resultados finais de
desenvolvimento embrionário e prenhez. Dois experimentos foram conduzidos com o
objetivo de avaliar a influência da concentração de oxigênio na maturação in vitro
(MIV) e fecundação in vitro (FIV) de oócitos bovinos e da suplementação protéica no
cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. Complexos cumulus-oócitos imaturos
(COC) obtidos de fêmeas Bos taurus indicus por aspiração folicular transvaginal
guiada por ultra-sonografia (OPU) foram divididos homogeneamente quanto ao
número e a qualidade entre os tratamentos, sendo maturados por 24h, em TCM-199
modificado, acrescido FSH, LH, Estradiol, EGF, Insulina e 10% de SFB. Sêmen
congelado selecionado por gradientes de Percoll (2 x 106 células/mL) foi utilizado
para a fecundação em Fert-TALP com heparina e PHE, por 18 a 22h. Os prováveis
zigotos foram cultivados in vitro em SOFaaci por 6 a 9 dias em atmosfera de 5%CO2,
5%O2 e 90% N2. Todas as etapas foram conduzidas em estufa a 39ºC com umidade
saturada. Os percentuais de clivagem e de blastocistos foram analisados pelo
procedimento GLM. As taxas de eclosão dos blastocistos e de prenhez foram
comparadas por Qui-quadrado com significância de 5%. No experimento I (11
repetições), a MIV e FIV dos COC (n=1092) foram realizadas sob atmosfera de 5%
de CO2 em ar (20%O2) ou em 5%CO2, 5%O2 e 90% N2 (5%O2). O experimento II foi
dividido em 2 etapas (IIa e IIb). No experimento IIa (n=1745 COC) após a MIV e FIV
foi realizado o CIV em meio SOFaaci acrescido de 4mg/mL albumina sérica bovina (BSA) ou 4mg/mL de BSA + 2% de soro fetal bovino (BSA+SFB). No experimento
IIb (n=704 COC), após a MIV e FIV, o CIV foi conduzido nos dois meios do
experimento IIa (BSA e BSA+SFB) e um terceiro grupo onde o SOFaaci+BSA foi
suplementado com 2% de SFB no quarto dia de cultivo (BSA+SFBD4). As
avaliações morfológicas foram efetuadas no D2 (clivagem), D7 (blastocistos e grau
de qualidade), D9 (blastocistos eclodidos) e taxa de prenhez aos 45 (experimento I)
e 60 dias (experimento II), considerando-se o dia da fecundação como D0. No
experimento I, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de clivagem (69 e 70%),
blastocistos em D7 (37 e 38%) e blastocistos qualidade I (79 e 74%) entre
atmosfera de 5%O2 ou 20% de O2, respectivamente. A taxa de eclosão em D9 sob
o total de oócitos MIV foi superior (P<0,05) no grupo 5%O2 (21%) comparado ao
grupo MIV e FIV sob 20%O2 (11%). A taxa de prenhez aos 45 dias dos embriões
transferidos (n=278) foi semelhante (P=0,15) entre os tratamentos (25,8 e 33,6%
para 5%O2 e 20%O2 respectivamente). No experimento IIa, a taxa de blastocistos
(51,5%) e de blastocistos qualidade I (41%) em D7, foi superior (P<0,05) para o
grupo BSA+SFB em relação ao BSA (42 e 30%), respectivamente. No experimento
IIb, a taxa de blastocistos foi superior (P<0,05) no grupo BSA+SFB e semelhante
(P>0,05) entre o grupo BSA e BSA+SFBD4. A taxa de blastocistos qualidade I foi
superior para os grupos BSA+SFB (34%) e BSA+SFBD4 (32,2%) em comparação
ao grupo BSA (19,9%). A taxa de prenhez em relação aos embriões transferidos
(n=820) foi semelhante entre os tratamentos nos experimentos IIa e IIb. A taxa de
prenhez correspondente aos oócitos colocados para MIV foi superior (P<0,05) para o
grupo BSA+SFB (16%) comparado ao grupo BSA (12%) no experimento IIa. Não há
comprometimento da PIV de embriões bovinos bem como da taxa de prenhez
quando a MIV, FIV e CIV são conduzidas com 5%O2, 5%CO2 e 90%N2. A produção
in vitro de embriões é incrementada pela adição de 2% de SFB ao meio de CIV, sem
prejudicar a qualidade morfológica dos mesmos e a taxa de prenhez. A porcentagem
de prenhez produzida em relação aos COC colocados para MIV é aumentada pela
adição de 2% de SFB ao meio de cultivo in vitro SOFaaci+BSA.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/4023 |
| Date | 18 May 2006 |
| Creators | Leivas, Fábio Gallas |
| Contributors | Silva, Carlos Antonio Mondino, Seneda, Marcelo Marcondes, Pimentel, Cláudio Alves, Schossler, Deila Rosely Carneiro, Rubin, Mara Iolanda Batistella |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 300, 300, 300, 300, 300, 300, 903ff6ef-b847-4354-89fa-8bcae7add9e0, 7c915578-af39-4e14-b358-bddee2935caf, 30f4c358-5ad1-4a96-b86d-968224fd6ddd, d7fa8774-5b90-48f5-8ece-8b6e703d0100, 85b301bb-896e-4acf-8970-f45452c2ada7, 2705e089-8871-4235-8117-26add0b49305 |
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