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Previous issue date: 2008-08-06 / Nowadays, dengue constitute the major public health problem, because is relevant cause of
illness and death between thousands people that resident in the tropical and subtropical
regions in world. The dengue virus is classified as four serotypes (DENV-1, 2, 3 and 4)
according to antigenic differences and characterized intra-typical groups called genotypes.
The laboratorial surveillance enables the diagnostic confirmation of dengue infection and
monitoring serotypes circulating through the routine diagnostic techniques. Recently, the
use molecular techniques has contributed to characterize and monitoring of the genotypes
potentially virulent during epidemic and knowledge of biology of dengue virus. This thesis
was organized in an introduction section, that include a literature review on dengue, and
two manuscripts that describing the research conducted with focus on laboratory diagnostic
and molecular epidemiology. The first manuscript entitled Laboratorial Surveillance of
Dengue Virus in Central-Brazil, 1994-2003, was published at Journal of Clinical Virology,
2006 37 (3): 179-83. In this study we present the results of the virological surveillance for
dengue cases conducted in the city of Goiânia (~1,200,000 population) from 1994 to 2003.
Suspected cases were from the main public infectious disease reference hospital and
outpatient clinics covering the metropolitan area. Serological and virus isolation tests were
conduced at the regional reference laboratory. Our objective was to report dengue
circulating serotypes from 1994 to 2003 and the role of distinct serotypes on dengue
clinical outcomes in Central Brazil and to characterize serotypes and genotypes by reverse
transcriptase PCR (RT-PCR) and by restricted site-specific PCR (RSS-PCR) patterns in
selected samples. Laboratory surveillance identified mainly DEN-1 serotype from 1994 to
2002 shifting to a high circulation of DEN-3 in 2003. The adults (87,4%) were the most
affected group and dengue fever accounted for the majority of the cases. Diagnosis of dengue was confirmed in ~50% of the suspected and enhanced by RT-PCR. RSS-PCR
patterns for DEN-1 and DEN-3 corresponded to the circulating subtypes in the country.
The infection DENV-3 did not suggest a major role of infecting DEN-3 in increasing
disease severity during its first-year spread in Central Brazil. The second manuscript, to be
submitted for publication is entitled: Epidemiologia Molecular do Vírus Dengue tipo 3 em
Goiânia GO, 2005-2006. The objective of this manuscript was to characterize the
DENV-3 genotype circulating isolated from well-characterized clinical and laboratory
samples in Goiânia-GO/Brasil. Seven samples had sequences of the prM/M/E region
obtained and comparative analysis was performed with the reference strains. The results
showed the homology of the genomics sequences with genotype III strains. The nucleotide
identity of the all the samples varied from 97.0% to 99.6% and the amino acid sequences
from 97.5% to 99.5%. The analysis of the nucleotide sequence revealed silent mutation and
14 amino acid changes in the protein deduced from gene prM/M/E. In conclusion, the
study confirms that the strains of DENV-3 in Central Brazil relate to genotype III. The
genomic changes along Domain III of the protein E were observed, which could affect the
pathogenicity, but were not consistent between samples of DCC and DHF. Samples of
patients with dengue fever had mutations related to viral attenuation. More investigation is
necessary to evidence of genomic changes found in relationship with clinical forms. / Atualmente, a dengue representa um dos maiores problemas em saúde pública, pois é
causa de doença e morte entre milhares de pessoas que residem nas regiões tropicais e
subtropicais do mundo. Os vírus dengue existem como quatro sorotipos virais (DENV-1 a
DENV-4) de acordo com diferenças antigênicas, sendo caracterizados grupos intra-típicos
denominados genótipos. A vigilância laboratorial possibilita a confirmação diagnóstica de
infecção por dengue e o monitoramento de sorotipos circulantes, através de técnicas
diagnósticas de rotina. Recentemente, o uso de técnicas moleculares tem contribuído para a
caracterização e monitoramento de genótipos potencialmente virulentos na vigência de
epidemias e melhor entendimento da biologia do vírus. Esta tese de doutorado compreende
uma introdução que contempla uma revisão da literatura sobre dengue e dois manuscritos
que descrevem as pesquisas realizadas com enfoque no diagnóstico laboratorial e
epidemiologia molecular. O primeiro manuscrito intitulado Laboratorial Surveillance of
Dengue Virus in Central-Brazil, 1994-2003, foi publicado no Journal of Clinical Virology,
2006 37 (3): 179-83. Neste estudo, apresentamos os resultados de uma vigilância
laboratorial conduzida na cidade de Goiânia na região Centro-Oeste do Brasil, desde a
introdução dos vírus dengue em 1994 até 2003. Casos com suspeita clínica de dengue
foram atendidos em unidades de saúde e hospitais de referência da região metropolitana e
os testes sorológicos e/ou isolamento viral realizados no laboratório de referência estadual
LACEN-GO. Nosso objetivo foi descrever sobre os sorotipos virais circulantes de
dengue nos anos de 1994 a 2003 e o seu papel nos desfechos clínicos de dengue na região
Centro-Oeste do Brasil e caracterizar sorotipos e genótipos ou subtipos genômicos pela
RT-PCR e RSS-PCR em amostras selecionadas. O sorotipo DENV-1 foi identificado como
prevalente nos anos 1994 a 2002, sendo substituído por DENV-3 em 2003. Os adultos (87,4%) foram mais atingidos e a dengue clássica a mais diagnosticada. A dengue foi
confirmada em 50% dos casos suspeitos de dengue incrementado pela RT-PCR. Os
genótipos ou subtipos genômicos do DENV-1 e DENV-3 corresponderam circulantes no
país. A infecção pelo DENV-3 não sugere um papel relevante no aumento da gravidade da
doença durante seu primeiro ano de dispersão no Centro-Oeste do Brasil. O segundo
manuscrito, a ser submetido à publicação, foi intitulado Epidemiologia Molecular do Vírus
Dengue tipo 3 em Goiânia GO, 2005-2006. O objetivo desse trabalho foi caracterizar o
genótipo circulante do DENV-3 isolado de amostras bem caracterizadas clínica e
laboratorialmente em Goiânia-GO/Brasil e analisar as alterações genômicas encontradas.
Sete seqüências regiões prM/M/E, foram obtidas e analisadas em comparação com cepas
protótipo do DENV-3. As seqüências do estudo apresentaram maior homologia com a
cepas do genótipo III. O percentual de identidade nucleotídica das amostras do DENV-3
seqüenciadas variou de 97,0% a 99,6% e de aminoácidos 97,5% a 99,5%, mostrando-se
conservadas. A análise da seqüência nucleotídica das amostras do estudo revelou mutações
silenciosas e 14 substituições de aminoácidos na seqüência da proteína deduzida do gene
prM/M/E. Em conclusão, o estudo confirma que as cepas de DENV-3 da região centrooeste
pertencem ao genótipo III. Alterações genômicas significativas foram observadas ao
longo do domínio III da proteína E, as quais poderiam afetar a patogenicidade, entretanto
não foram consistentes entre as amostras de DCC e FHD. As amostras de pacientes com
dengue clássica apresentaram alterações em resíduos de aminoácidos no domínio III
relatados como pontos de atenuação viral. Maiores investigações serão necessárias para
confirmar as alterações encontradas e sua relação com as formas clínicas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tde/1589 |
| Date | 06 August 2008 |
| Creators | FÉRES, Valéria Christina de Rezende |
| Contributors | MARTELLI, Celina Maria Turchi |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Doutorado em Medicina Tropical, UFG, BR, Ciências da Saúde |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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