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Clonagem e expressão das enzimas heterólogas xilose redutase e xilitol desidrogenase em Saccharomyces cerevisiae e análise do consumo de xilose por linhagens recombinantes

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia. / Submitted by Gabriela Farias Gubert null (gabriela.gubert@grad.ufsc.br) on 2017-07-14T14:00:05Z
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Gabriela Farias Gubert.pdf: 903100 bytes, checksum: 8ad4192c07dd690dabcaa005dbeea52b (MD5) / O biocombustível tornou-se uma alternativa ao uso do petróleo. Nesse
cenário o Brasil apostou no etanol. Industrialmente, sua produção
acontece através do processo de fermentação alcóolica pela levedura
Saccharomyces cerevisiae em matéria vegetal, como a cana-de-açucar
(Saccharum spp.). Porém, a levedura não apresenta o metabolismo
necessário para fermentar pentoses, como a xilose, um dos carboidratos
mais abundantes em matéria lignocelulósica. Investigando leveduras que
fermentam xilose, encontramos um processo de redução e oxidação
mediado pelas enzimas Xilose Redutase (XR) e Xilitol Desidrogenase
(XDH). Portanto, uma maneira de aumentar a produção de etanol no
país, sem aumentar a área plantada de cana-de-açucar, é a criação de
linhagens de S. cerevisiea transformantes com as enzimas supracitadas.
Para isso, buscamos as enzimas com maior atividade entre as espécides
fermentadoras de xilose, chegando as seguintes duas espécies:
Spathaspora arborarie e Spathaspora passalidarum. Sendo que a
enzima XR de S. arborarie, além de apresentar alta atividade, apresenta
atividade com dois cosubstratos, NADPH e NADH. Já a enzima XDH
de S. passalidarum apresentou a maior atividade entre as enzimas XDH
já descritas, e uma dependência do cosubstrato NAD+. O uso conjunto
das enzimas é interessante pela reciclagem dos cosubstratos. Portanto,
nesse trabalho, buscamos criar um plasmídeo com um forte promotor
constitutivo PGK para XR e TEF para XDH com a intenção de
transformar o organismo S. cerevisiae para futura produção de etanol a
partir de xilose. Além disso, estudos de engenharia genética
demonstraram um efeito positivo da deleção do gene PHO13 de S.
cerevisiae, já que essa mudança parece aumentar a expressão de
enzimas da Via Glicolítica e da Via das Pentoses Fosfato. Por isso,
utilizamos linhagens recombinantes pho13∆ com expressão das enzimas
heterólogas supracitadas e comparamos seu perfil fermentativo com
linhagens com a mesma expressão de enzimas, porém não pho13∆.
Como resultado, percebemos que a expressão das enzimas permite o
consumo de xilose, porém percebemos pouca produção de etanol. A
linhagem pho13∆ se torna vantajosa em fermentação com alta densidade
de xilose, 10%, produzindo o dobro de etanol da linhagem não pho13∆.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/177540
Date14 July 2017
CreatorsGubert, Gabriela Farias
ContributorsUniversidade Federal de Santa Catarina, Stambuk, Boris Juan Carlos Ugarte, dos Santos, Angela Alves
PublisherFlorianópolis, SC.
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Format40 f.
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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