Bendrąja prasme kolagenolizė - dalinė arba visiška konkretaus kolageno tipo molekulės proteolizė, vykstanti in vivo (fiziologinių ar patologinių procesų metu) ar in vitro. Vandens molekulė, kaip įprasta hidrolizės reakcijoms, būtinas antrasis kolagenolizės proceso substratas. Kolagenolizę katalizuoja kolagenoliziniu specifiškumu pasižyminčios peptidazės. Kolagenai -vieni svarbiausių baltymų tiek atliekamų funkcijų, tiek biotechnologinio panaudojimo atžvilgiais. Jų panaudojimas neįmanomas be kolagenolizės proceso, taigi -kolagenolizinių peptidazių. Tik nedaugeliui peptidazių būdingas kolagenolizinis specifiškumas. Eukariotų ir prokariotų skirtumai kolageno kaip kolagenolizės substrato produkavimo galimybės atžvilgiu, taip pat netapačios šio fibrilinio baltymo biologinės funkcijos šiuose gyvybės domenuose lėmė skirtumus tarp prokariotų ir eukariotų kolagenolizinių peptidazių. Nors prokariotinės kolagenolizinės peptidazės tiriamos vis intensyviau, daugiau dėmesio skiriama patogeninių kamienų (Clostridium, Porphyromonas genčių) produkuojamoms kolagenazėms. Tuo tarpu nepatogeninių prokariotų kolagenazių tyrimai vykdomi rečiau. Ilgainiui tai gali lemti nevisavertį prokariotų kolagenazių biotechnologinio potencialo išnaudojimą bei iš dalies riboti pačio kolageno taikymą, sprendžiant konkrečias problemas. Biotechnologinio panaudojimo poreikiams tenkinti būtina klonuoti kolagenolizinių peptidazių genus, pritaikant efektyvias ekspresijos sistemas. Darbo tikslas: Atlikti termofilinių... [toliau žr. visą tekstą] / Collagens are one of the most important proteins including their functions and biotechnological application. The biotechnological application of collagens wouldn‘t be possible without the process of collagenolysis which is catalysed by collagenolytic peptidases. The aim of this work was to perform transcriptional analysis of U32.002 (Helicobacter-type) collagenolytic peptidase gene and its cloning as well as basic analysis. The analysis of U32.002 peptidase gene transcription was performed after the extraction of total RNA from G. lituanicus DSM 15325T cells that were in two different stages of growth. Reverse transcription assays were performed after total RNA extraction. After the process of reverse transcription samples of cDNA were used for the diagnostic PGR that was carried out by using five different primers. This gene was cloned with and without putative signal/pro sequence in order to produce the preparation of U32.002 peptidase. Full sequence of U32.002 peptidase gene was cloned into pTZ57R/T and then into the expression vector pET28c(+). U32.002 gene without putative signal/pro sequence was cloned into pJET1.2, and then into pET28c(+). SDS-PAGE and MALDI-TOF analyses were performed in order to determine the fact of expression in E. coli BL21 (DE3). Full scale expression optimisation was performed, as well. The influence of calcium and zinc ions to the structural stability of U32.002 peptidase with putative signal/pro sequence was analysed. The collagenolytic... [to full text]
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LABT_ETD/oai:elaba.lt:LT-eLABa-0001:E.02~2011~D_20140627_165358-64049 |
| Date | 27 June 2014 |
| Creators | Jasilionis, Andrius |
| Contributors | Kuisienė, Nomeda, Vilnius University |
| Publisher | Lithuanian Academic Libraries Network (LABT), Vilnius University |
| Source Sets | Lithuanian ETD submission system |
| Language | Lithuanian |
| Detected Language | English |
| Type | Master thesis |
| Format | application/pdf |
| Source | http://vddb.library.lt/obj/LT-eLABa-0001:E.02~2011~D_20140627_165358-64049 |
| Rights | Unrestricted |
Page generated in 0.0021 seconds