Transendothelial migration is a key process in lymphocyte trafficking. It is known that growth hormone (GH) modulates intrathymic T cell migration and that directly or indirectly influences the biology of endothelial cells and thymocytes. In this context, we evaluated the effect of GH on the transendothelial migration of thymocytes, in the presence or absence the chemokine CXCL12. For the study, we applied the murine thymic endothelial cell line (tEnd.1) and thymocytes freshly isolated from male C57BL/6 mice aged 4-6 weeks. Through in vitro studies of transendothelial migration of thymocytes, and analyses by flow cytometry, we observed a statistically significant reduction in the numbers of transmigrated thymocytes, mainly seen for CD4+CD8+ cells, across endothelial barriers treated with GH [100 ng/ml], for 8 h. Importantly, this effect was reverted when thymocytes were treated with GH [100 ng/ml] for 1 h. Similar effects were noted in transmigration through joint action of GH and CXCL12. Despite the fact that all the CD4/CD8-defined subsets have been affected, we observed a statistically significant increase in the number of transmigrated thymocytes, mainly of CD4+CD8+ and CD4+CD8- cells, when they were treated with GH and allowed to migrate in response to CXCL12, when compared to untreated controls in response to CXCL12. We demonstrated, by real-time PCR, that GH at 100 ng/ml did not modulate the expression of VCAM-1 and CXCL12 by tEnd.1 cells treated for 8 h. Furthermore, we found by cytofluorimetric assay that GH alone did not change the membrane expression of VLA-4 and CXCR4 receptor in transmigrated thymocytes. Through joint action of GH and CXCL12, was observed increase in expression of VLA-4 on CD4-CD8+ cells from the group of GH-treated thymocytes, when compared to groups in which endothelial cells were treated. As for expression of CXCR4, we found that the GH/CXCL12 decreased the expression of this receptor on transmigrated thymocytes, mainly in CD4+CD8+ cells from the group in which the thymocytes were treated. In conclusion, our results reinforce that GH influence the thymus physiology and modulate the biology of endothelial cells and thymocytes, with differential effects in the process of endothelial transmigration of murine thymocytes. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A transmigração endotelial é um processo essencial no trânsito de linfócitos. É sabido que o hormônio do crescimento (GH) está envolvido na migração intratímica de células T, e que influencia direta ou indiretamente a biologia das células endoteliais e dos timócitos. Neste contexto, avaliamos a ação do GH na migração transendotelial de timócitos, frente ou não à quimiocina CXCL12. Para o estudo, utilizamos a linhagem endotelial tEnd.1 e timócitos recém isolados de camundongos machos C57BL/6 de 4-6 semanas. Através do ensaio de transmigração endotelial in vitro de timócitos, e análise por citometria de fluxo, verificamos uma redução estatisticamente significativa no número de timócitos transmigrados, principalmente nas subpopulações CD4+CD8+, frente a barreiras endoteliais tratadas com GH [100 ng/ml], por 8 horas. Este efeito foi revertido quando os timócitos foram tratados com GH [100 ng/ml], por 1 hora. Efeitos similares na transmigração foram notados pela ação do GH frente a CXCL12. Apesar de todas as subpopulações CD4/CD8 terem sido afetadas, observamos um aumento estatisticamente significativo no número de timócitos transmigrados, principalmente das células CD4+CD8+ e CD4+CD8-, quando foram tratados com GH e colocados para migrar em presença da CXCL12, em relação ao grupo controle não tratado e em presença da quimiocina. Demonstramos, ainda, por RT-PCR, que o GH na concentração de 100 ng/ml, não modulou a expressão de VCAM-1 e CXCL12 por células tEnd.1 tratadas, por 8 horas. Além disso, verificamos por análise citofluorimétrica, que o GH sozinho não alterou a expressão dos receptores VLA-4 e CXCR4 nos timócitos transmigrados. Pela ação conjunta do GH e CXCL12, foi registrado aumento na expressão de VLA-4 sobre células CD4-CD8+ no grupo experimental em que os timócitos foram tratados com GH, quando comparamos aos grupos onde as células endoteliais foram tratadas. Quanto à expressão de CXCR4, verificamos que o GH/CXCL12 diminuiu a expressão deste receptor sobre timócitos transmigrados, principalmente em células CD4+CD8+, nos grupos experimentais em que os timócitos foram tratados. Em conclusão, nossos dados fortalecem o postulado de que o GH influencia a fisiologia do timo, e modula a biologia das células endoteliais e dos timócitos, com efeitos diferenciais no processo de transmigração endotelial de timócitos murinos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufal.br:riufal/927 |
| Date | 06 May 2009 |
| Creators | Martins Neto, Adalberto Alves |
| Contributors | Smaniotto, Salete, Smaniotto, S., Moreira, Magna Suzana Alexandre, ALEXANDRE-MOREIRA M. S, Rabelo, Luiza Antas, RABELO, L. A., Almeida, Vinicius Cotta de, http://lattes.cnpq.br/2586766800790204 |
| Publisher | Universidade Federal de Alagoas, BR, Biologia, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, UFAL |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFAL, instname:Universidade Federal de Alagoas, instacron:UFAL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | bitstream:http://www.repositorio.ufal.br:8080/bitstream/riufal/927/1/Dissertacao_Adalberto+Alves+Martins+Neto_2009.pdf, bitstream:http://www.repositorio.ufal.br:8080/bitstream/riufal/927/2/Dissertacao_Adalberto+Alves+Martins+Neto_2009.pdf.txt |
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