Myelin, a complex lipid-rich membranous structure, enables rapid conduction of nerve impulses. Schwann cells (SCs) myelinate axons of the peripheral nervous system through a stringently controlled process, requiring basal lamina assembly. Laminin, an essential constituent of this matrix, directs SC function, development and myelination by differentially activating cell surface receptors such as integrins. We previously demonstrated the phosphorylation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) p38 following addition of exogenous laminin to SC-dorsal root ganglion neuron (DRGN) co-cultures. This activation is indispensible to the onset of myelination and is postulated to occur through integrin activation. The objective of this thesis was to identify effectors of basal lamina-integrin signaling resulting in p38 MAPK activation. We thus investigated the involvement of two known participants of integrin signaling, src-like kinases (SLKs) and Rho GTPases. Contrary to conclusions drawn from SLK-null mice, we identify roles for SLKs in peripheral myelination using SC-DRGN co-cultures and SLK-specific inhibition. Using siRNA knockdown, we pinpoint Fyn and Lyn as regulators of Krox-20, a transcription factor key to PNS myelin formation and maintenance. Furthermore, using the SLK-specific pharmacological inhibitor, PP2, we demarcate SLKs as upstream activators of p38 MAPKs, Akt and ERKs, three protein kinases implicated in SC development, survival and proliferation, respectively. Rho GTPases regulate actin remodeling, linking integrins to the cytoskeleton. Through ectopic overexpression, we show RhoA, Rac1 and Cdc42 are modulators of SC morphological homeostasis. Pharmacologically, we identify Rho kinase (ROCK), a downstream effector of RhoA, as a regulator of Krox-20 but not as an activator of p38 MAPK. Similarly, results obtained by inhibiting Rac1, indicate that it does not mediate p38 activation. Finally, we report that p38 acts on multiple transcription / La myéline, une structure membraneuse complexe, et riche en lipides, permet la conduction rapide des impulsions nerveuses. Les cellules de Schwann (CS) myélinisent les axones du système nerveux périphérique (SNP) à travers un processus strictement contrôlé qui requière l'assemblage de la lame basale. La laminine, un constituent essentiel de cette matrice, dirige la fonction, le développement et la myélinisation des CS en activant différents récepteurs de surface tels que les intégrines. Nous avons précédemment démontré la phosphorylation de la mitogènes activée par des agents protéine kinase (MAPK) p38 après l'ajout de laminine exogène à des co-cultures CS-neurone ganglionnaire de la racine dorsale (NGRD). Cette activation est indispensable au commencement de la myélinisation et se produit présumément à travers l'activation des intégrines. L'objectif de cette thèse a été d'identifier les effecteurs de la signalisation lame basale-intégrine causant l'activation de la MAPK p38. Nous avons donc regardé l'implication de deux participants connus à la signalisation des intégrines, src-like kinases (SLKs) et les Rho GTPases. Contrairement aux conclusions dérivées des souris SLK-nulle, nous avons identifié des rôles pour SLKs dans la myélinisation périphérique en utilisant des co-cultures CS-NRDG et une inhibition spécifique des SLKs. En utilisant un knockdown par RNAi, nous avons identifié Fyn et Lyn comme régulateurs de Krox-20, un facteur de transcription clé pour la formation et la maintenance de la myéline du SNP. De plus, en utilisant un inhibiteur pharmacologique spécifique pour SLK, PP2, nous avons demarqué les SLKs comme des marqueurs en amont des MAPKs p38, Akt et ERKs, trois protéines kinases impliquées respectivement dans le développement, la survie et la prolifération des CS. Les Rho GTPases régulent le remodelage de l'actine en liant les intégrines au cytosquelette. En utilisant une approche$
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.94961 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Hossain, Shireen |
| Contributors | Guillermina Almazan (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Doctor of Philosophy (Department of Pharmacology & Therapeutics) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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