The F prostanoid receptor (FP receptor) is a GPCR that, upon binding of prostaglandin F2alpha (PGF2alpha), mediates IP3 production and PKC-dependent MAPK activation. We report that AL-8810, a characterized antagonist for PGF2alpha-dependent IP3 production, potently activates ERK1/2 in a PKC-independent manner, since PGF2alpha induced PKCbeta1-GFP translocation, while AL-8810 did not. AL-8810, though, induced EGFR phosphorylation, and the resultant ERK1/2 activation was inhibited by an EGFR antagonist, which suggested a transactivation signalling pathway. Batimastat, a matrix metalloprotease (MMP) inhibitor abolished both AL-8810- and PGF2alpha-induced ERK1/2, and therefore PGF2alpha may also signal through EGFR-independent transactivation. In osteoblasts, both PGF2alpha and AL-8810 activated MAPK in an EGFR-dependent manner, though PKC remained essential for PGF2alpha, as IL-6 and cell proliferation (known PKC effects) were induced by PGF2alpha but not AL-8810. Here, we highlight the biased signalling of AL-8810 on FP receptor produced MAPK through EGFR-MMP-mediated transactivation and also suggest a novel PGF2alpha-induced PKC-MMP, EGFR-independent, pathway. / Le récepteur F-prostanoïde (FP) est un récepteur de la famille des RCPG (récepteurs couplés aux protéines G), qui, une fois lié par son ligand naturel, la prostaglandine F2alpha (PGF2alpha), induit la production d'IP3, menant à l'activation de la protéine kinase C (PKC) suivie de l'activation des MAP kinases ERK1/2. Dans ce manuscrit, nous démontrons que l'AL-8810, étant reconnu comme un antagoniste de la production d'IP3 induite par le PGF2alpha, est capable d'activer la voie des ERK1/2 d'une manière indépendante à la PKC. En effet, nous démontrons que la PKCbeta1-GFP transloque à la membrane plasmique suite au traitement avec la PGF2alpha, alors que l'AL-8810 n'induit aucune translocation. Cependant, l'AL-8810, contrairement à la PGF2alpha, est capable d'induire la phosphorylation du récepteur à l'EGF (EGFR), menant à l'activation de ERK1/2. La phosphorylation de l'EGFR induite par l'AL-8810 est blocable par une antagoniste de l'EGFR, suggérant un mécanisme de transactivation de ce dernier. De plus, le batimastat, un inhibiteur non-spécifique des métalloprotéases matricielles (MMP) abolit l'induction des ERK1/2 par la PGF2alpha ainsi que par l'AL-8810, suggérant que la PGF2alpha signale probablement par un mécanisme indépendant de la transactivation de l'EGFR. Dans des cellules ostéoblastes, la PGF2alpha et l'AL-8810 activent ERK1/2 d'une manière dépendante au EGFR, même si la PKC demeure essentielle pour l'activation des voies en aval de la PGF2alpha, puisque l'interleukine-6 et la prolifération cellulaire (tous deux dépendants de la PKC) sont induits seulement par la PGF2alpha. En conclusion, nous montrons l'activation biaisée du FP par l'AL-8810 menant à l'activation de ERK1/2 via un mécanisme de transactivation par la voie EGFR-MMP. Ces résultats suggèrent aussi un nouveau mécanisme d'activation de ERK1/2 indépendant du EGFR et induit par la voie PKC-MMP.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.96903 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Wisehart, Veronica |
| Contributors | Stephane Laporte (Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Medicine) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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