MACHADO, Rosângela Pinheiro Gonçalves. Modulação genética do bcl11a no perfil inflamatório, hemolítico, estresse oxidativo e nos níveis de hemoglobina fetal em pacientes com anemia falciforme. 2015. 89 f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) – Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-22T16:11:43Z
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Previous issue date: 2015 / 8
ABSTRACT
Sickle cell disease (SCD) is
an autosomal hereditary hemoglobinopathies caused by
a point mutation in the beta globin gene generates an abnormal hemoglobin called
hemoglobin S (Hb S) in homozygous. The disease is characterized by presenting a
variability of symptoms, which is due to m
ultiple factors, including fetal hemoglobin
(HbF), the haplotypes of the beta globin gene and polymorphisms BCL11A gene,
among others. The assessment of genetic modulators in AF has been developed in
order to improve the understanding of its pathophysiolog
y and direct therapeutic
approach aiming his individualization. The research set out to determine the genetic
modulation of polymorphisms BCL11A gene (rs4671393, rs7557939 and rs1186868)
on the inflammatory profile, hemolytic, oxidative stress and the conc
entrations of
HbF, Hb in patients with AF, in steady state. The study was cross and analytical type
with 42 adult patients receiving outpatient treatment at the University Hospital Walter
Cantídio (HUWC), with molecular diagnostics and haplotypes of the be
ta globin gene
S previously realized. The patients were taking hydroxyurea (HU), on average 20 mg
/ kg body weight. Biological samples of peripheral blood were obtained for performing
laboratory tests: The dosages of IL
-
6 pro
-
inflammatory cytokine, IL
-
17,
TNF
-
alpha
and IL
-
10 and anti
-
inflammatory TGF
-
beta by ELISA; reticulocyte counts by the
manual method, dosage methemoglobin (MetHb) and lactate dehydrogenase (LDH)
by spectrophotometry; nitrite (NOx), malondialdehyde (MDA) serum, erythrocyte
antioxidant en
zymes catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) for kits and
spectrophotometry. Genetic polymorphisms of BCL11A gene regions, rs4671393,
rs7557939 and rs1186868 were determined by Real Time PCR. Dosages of HbF,
and HbS were performed by HPLC (High Pe
rformance Liquid Chromatography). The
data age, sex and clinical events were obtained from medical records. All statistical
analysis was performed using the free software R, in version 3.1.2. To analyze the
frequency of sex and genotype by region and assoc
iations between the type of
haplotype and clinical events with the regions of BCL11A, they used the chi
-
square
test and Fisher's exact. Held the ANOVA parametric test (obtained under
distributional assumptions), and the non
-
parametric Kruskal
-
Wallis to ana
lyze the
association of genotypes BCL11A gene with age, the levels of Hb, HbF, inflammatory
profile, hemolytic and oxidative stress. It was considered significant at the 5% level.
Most patients (57.14%) were female. The age of the included patients was 18
-
65
years, mean and median value of 35.1 and 33 years respectively. Only rs7557939 of
BCL11A, genotype A / G was the most prevalent and the prevalence of genotype A /
G was higher in women, while in men the highest prevalence was genotype A / A.
However, rs
1186868 of BCL11A, the majority (56.52%) of women had the C / T
genotype and half the men showed the T / T genotype. No BCL11A region of the
gene showed a significant association with haplotype S beta
-
globin gene Regarding
gene BCL11A modução the levels of
HbF, and HbS, it was found that there was a
significant rs1186868 results in the mutant genotype T / T, showed higher levels o Hb and lower levels of HbF. In rs7557939 there was a significant decrease in HbF in
the mutant allele A / A, however, there was
no relationship with the HbS. There was
no association between SNPs in the three regions studied, with the average number /
median of inflammatory modulators, hemolysis markers of oxidative stress and
clinical events at the level of 5% .The findings reinf
orce the hypothesis of genetic
modução of BCL11A gene polymorphisms in relation to levels of HbF, where the wild
allele, rs7557939 and rs1186868 in the regions had a protective character in
prognosis decorência of referral increased levels of HbF in patien
ts with AF study. / A anemia falciforme (AF) é uma hemoglobinopatia hereditária autossômica causada por uma mutação pontual no gene da beta globina gerando uma hemoglobina anormal denominada de hemoglobina S (HbS), em homozigose. A doença se caracteriza por apresentar uma variabilidade do quadro clínico, que se deve à múltiplos fatores, dentre eles a concentração de hemoglobina fetal (HbF), os haplótipos do gene da beta globina e os polimorfismos do gene BCL11A, entre outros. A avaliação dos moduladores genéticos na AF tem sido desenvolvida com a finalidade de melhorar o entendimento da sua fisiopatologia e direcionar a abordagem terapêutica objetivando sua individualização. A pesquisa se propôs a determinar a modulação genética dos polimorfismos do gene BCL11A (rs4671393, rs7557939 e rs1186868) sobre o perfil inflamatório, hemolítico, no estresse oxidativo e nas concentrações das HbF, HbS nos pacientes portadores de AF, em estado estacionário. O estudo foi do tipo transversal e analítico com 42 pacientes adultos, em acompanhamento ambulatorial no Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC), com diagnóstico molecular e haplótipos do gene da beta globina S previamente realizados. Os pacientes estavam em uso de Hidroxiuréia (HU), em média, 20mg/kg de peso corporal. Amostras biológicas de sangue periférico foram obtidas para a realização dos exames laboratoriais: as dosagens das citocinas pró inflamatórias IL-6, IL-17, TNF-alpha e das antiinflamatórias IL-10 e TGF-beta, por Elisa; contagem de reticulócitos por metodologia manual, dosagem de metemoglobina (MetHb) e lactato desidrogenase (LDH), por espectrofotometria; do nitrito (NOx), malonaldeído (MDA) séricos, as enzimas antioxidantes eritrocitárias, catalase (CAT) e da glutationa peroxidase (GPx) por kits e espectrofotometria. Os polimorfismos genéticos do gene BCL11A nas regiões, rs4671393, rs7557939 e rs1186868 foram determinados por Real Time PCR. As dosagens da HbF e HbS foram realizadas por HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Os dados idade, sexo e eventos clínicos foram obtidos dos prontuários. Toda a análise estatística foi realizada usando o software livre R, na versão 3.1.2. Para análise da frequência do sexo e dos genótipos, por região e das associações entre o tipo de haplótipo e dos eventos clínicos com as regiões do BCL11A, foram usados os testes de Qui-quadrado e o exato de Fisher. Realizou-se o teste paramétrico de ANOVA (obtido sob suposições distribucionais), bem como o teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis para a análise da associação dos genótipos do gene BCL11A com a idade, os níveis de HbS, HbF, perfil inflamatório, hemolítico e do estresse oxidativo. Foi considerado significante ao nível de 5%. A maioria dos pacientes (57,14%) era do sexo feminino. A idade dos pacientes incluídos foi de 18 a 65 anos, com valor médio e mediano de 35,1 e 33 anos, respectivamente. Somente a rs7557939 do BCL11A, o genótipo A/G foi o mais prevalente e a prevalência do genótipo A/G foi maior nas mulheres , enquanto nos homens a prevalência maior foi do genótipo A/A. No entanto, a rs1186868 do BCL11A, a maioria (56,52%) das mulheres apresentaram o genótipo C/T e a metade dos homens apresentaram o genótipo T/T. Nenhuma região do gene BCL11A apresentou associação significativa com os haplótipos do gene da beta globina S. Em relação a modução do gene BCL11A com os níveis de HbS e HbF, verificou-se que na rs1186868 houve resultado significativo do genótipo mutante T/T, que apresentou maiores níveis de HbS e menores níveis de HbF. Na rs7557939 houve uma diminuição significante de HbF no alelo mutante A/A, porém, não houve relação com a HbS. Nâo houve associação entre os SNPs, nas três regiões estudadas, com relação ao número médio/mediano dos moduladores inflamatórios, marcadores de hemólise, do estresse oxidativo e dos eventos clínicos, ao nível de 5%.Os achados reforçam a hipótese da modução genética dos polimorfismos do gene BCL11A em relação aos níveis de HbF, onde os alelos selvagens, nas regiões rs7557939 e rs1186868 apresentaram um caráter protetor no prognóstico em decorência de terem apresentado aumento dos níveis de HbF, nos pacientes com AF do estudo.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/13717 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Machado, Rosângela Pinheiro Gonçalves |
| Contributors | Martins, Alice Maria Costa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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