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Previous issue date: 2010-03-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the hepatotoxic potential of d-limonene - a component of volatile oils extracted from citrus plants. The preclinical research was conducted in an animal model (rats) with emphasis on histopathological and immunopathological studies for determination of tissue lesions and understanding of their pathogenic mechanisms. Sixty-three Wistar rats were randomly divided into eight groups. In addition to the control groups (untreated or receiving only vehicle), experimental groups were treated for 30 or 45 days with d-limonene at doses of 25 mg/kg/day and 75 mg/kg/day. Two other groups (satellites) were followed for 60 days, receiving the substance only in the first 30 days in the same dosages of previous groups. To other rats group was given 20% ethanol in low doses (3.5 ml/kg/day), expecting to compare the alcohol toxic effects with those of d-limonene. Scores were statistically analyzed using Kruskal-Wallis and ANOVA with Tukey post-test (p <0.05). Biochemical researches showed no statistically significant elevations in levels of aspartate aminotransferase (AST) and alkaline phosphatase (ALP), while changes in alanine aminotransferase (ALT) were significant in the animals group treated with the higher dose of d-limonene. Histological analysis revealed the occurrence of inflammatory liver injury, parenchymal, chronic, small or medium intensity in the group treated with d-limonene. Hydropic degeneration, hepatocytic necrosis, hyperplasia of Kupffer cells, microvesicular steatosis and incipient fibrosis were the microscopic changes that variously accompanied the local inflammatory response.
Immunopathological studies indicated that liver injury was due in part to the presence of T lymphocytes (CD3 +) cytotoxic (CD8 +), reinforcing the theories advocated by several authors that cellular immunity participates in drug-induced hepatotoxicity. The complex pathogenic mechanism is probably initiated by the generation of secondary reactive substances to the oxidative metabolism of drugs. Such metabolites can combine
with macromolecules, damaging structures and cellular functions and forming immunogenic haptens. Hyperplastic Kupffer cells also contribute to the process of hypersensitivity, with the elaboration of cytokines. Ito cells are stimulated in the perisinusoidal spaces being transformed into myofibroblasts, matrix-substance producers, starting fibrogenic processes. In this experimental model with d-limonene, perisinusoidal thin collagen fibers were observed only with specific staining techniques (picrosirius red), indicating early fibrosis, in isolated outbreaks, associated with more significant inflammatory lesions. / Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial hepatotóxico do d-limoneno - um componente dos óleos voláteis, extraídos de plantas cítricas. A investigação pré-clínica foi realizada em modelo animal (ratos), com ênfase nos estudos histopatológicos e imunopatológicos, para determinação de lesões teciduais e compreensão de seus mecanismos patogênicos. Foram usados 63 ratos Wistar, distribuídos aleatoriamente em oito grupos. Além dos grupos controle (sem tratamento ou recebendo apenas veículo), os grupos experimentais foram tratados durante 30 ou 45 dias com d-limoneno, nas doses de 25 mg/kg/dia e 75 mg/kg/dia. Dois outros grupos (satélites) foram acompanhados durante 60 dias, recebendo a substância apenas nos primeiros 30 dias, nas mesmas dosagens dos outros grupos anteriores. A outro conjunto de roedores foi administrado etanol a 20%, em baixas doses (3,5 ml/kg/dia), na expectativa de comparar-se os efeitos tóxicos do álcool com os do d-limoneno. Os escores foram analisados estatisticamente utilizando-se os testes de Kruskal-Wallis e de variância com pós-teste de Tukey (p < 0,05). As pesquisas bioquímicas não demonstraram elevações estatisticamente significativas dos níveis de aspartato aminotransferase (AST) e fosfatase alcalina (FA), enquanto alterações de alanina aminotransferase (ALT) tiveram significância no grupo de animais tratados com a maior dose de d-limoneno. A análise histológica revelou a ocorrência de lesões hepáticas inflamatórias, parenquimatosas, crônicas, de pequena ou média intensidade, no grupo tratado com d-limoneno. Degeneração hidrópica, necrose hepatocítica, hiperplasia de células de Kupffer, fibrose incipiente e esteatose microvesicular foram as alterações microscópicas que, variavelmente, acompanharam a resposta inflamatória local.
Estudos imunopatológicos indicaram que a injúria hepática deveu-se em parte à presença de linfócitos T (CD3+) citotóxicos (CD8+), reforçando as teorias defendidas por vários autores de que a imunidade celular participa da hepatotoxicidade droga-induzida. O complexo mecanismo patogênico provavelmente é iniciado pela geração de substâncias reativas secundárias ao metabolismo oxidativo das drogas. Tais metabólitos podem conjugar-se com macromoléculas, prejudicando estruturas e funções celulares e formando haptenos imunogênicos. Células de Kupffer hiperplásicas também contribuem para o
processo de hipersensibilidade, com a produção de citocinas. Nos espaços perissinusoidais as células de Ito são estimuladas, transformando-se em miofibroblastos, produtores de substâncias matriciais, iniciando processos fibrogênicos. Neste modelo experimental com d-limoneno, fibras colagênicas finas, perissinusoidais, foram observadas apenas com técnicas específicas de coloração (vermelho picrossírius), indicando fibrose precoce, em focos isolados, associados às lesões inflamatórias mais significativas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.biblioteca.ufpb.br:tede/6845 |
| Date | 08 March 2010 |
| Creators | Ramos, Carlos Alberto Fernandes |
| Contributors | Almeida, Reinaldo Nobrega de |
| Publisher | Universidade Federal da Paraíba, Programa de Pós Graduação em Produtos Naturais e Sintéticos Bioativos, UFPB, BR, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB, instname:Universidade Federal da Paraíba, instacron:UFPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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