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Pontos quânticos como sondas fluorescentes no estudo da carcinogênese em Células Gliais

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-01-18T14:03:34Z
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Previous issue date: 2014-03-24 / Glioblastoma (grau IV) é o tumor mais agressivo e infiltrante do sistema nervoso central (SNC),
que mostra uma série de mutações, bem como alto grau de vascularidade, polimorfismo e atipia
celular nuclear. Infelizmente, diagnóstico precoce de tumores cerebrais é difícil, uma vez que
ferramentas de imagem não são eficientes para o diagnóstico correto desses tipos de tumores,
levando a falhas no tratamento. Aqui nós descrevemos a síntese, caracterização e conjugação de
pontos quânticos ou quantum dots (QDs) de telureto de cádmio (CdTe) recobertos com tiol e
com o anticorpo contra a proteína ácida fibrilar glial (anti-GFAP), bem como, a preparação de
lipossomas. O método de congelamento e descongelamento foi utilizado para encapsular os QDs
em diferentes tipos de lipossomas e liberá-los em células tronco. Os lipossomas vazios e
contendo CdTe QDs foram caracterizados por microscopia de fluorescência, microscopia
eletrônica de transmissão, tamanho e potencial zeta. Os QDs CdTe-anti-GFAP foram utilizados
para um novo direcionamento in vivo e método de imagem para detecção do tipo de tumor
glioblastoma U87 xenotransplantado em cérebro de camundongos suíços machos. CdTe QDs não
conjugados e CdTe QDs conjugados foram utilizados para marcar U87 linha de células de tumor
in vitro e astrócitos saudáveis. A citotoxicidade dos CdTe QDs com fluorescência no verde (530
nm) e no vermelho (644 nm), foi avaliada utilizando MTT nas células U87. O crescimento do
tumor foi visualizado no interior do cérebro pela marcação com hematoxilina e eosina e mostrou
a entrega com sucesso nas células U87 no parênquima cerebral. CdTe QDs conjugados com anti
- GFAP foram injectados na região do tumor e a sua marcação na linhagem celular U87 foi
visualizada por microscopia de fluorescência, mostrando dupla marcação com especificidade
para vimentina em glioblastomas imunorreactivos. Em comparação com as células tumorais
U87, que facilmente foram marcadas com o CdTe QDs conjugados com anti- GFAP, observouse
que os astrócitos saudáveis mantidos em culturas primárias tiveram uma maior resistência à
sua marcação e foram fracamente marcados. Os resultados descritos aqui direcionam para novas
perspectivas na utilização de CdTe QDs na detecção de gliobastoma , sugerindo uma potencial
aplicação em cirurgia guiada por imagem. / Glioblastoma (grade IV) is the most aggressive and infiltrating tumor of the central nervous
system (CNS), showing a variety of mutations as well as high degree of vascularity, cell
polymorphism and nuclear atypia. Unfortunately, early diagnostic of brain tumors is hard, as
imaging tools are not efficient for proper diagnosis of these types of tumors, leading to treatment
failures. Here we describe the synthesis, characterization and conjugation of thiol-capped CdTe
with anti-glial fibrillar acidic protein (anti-GFAP) and preparation of liposomes. The freeze and
thaw method was used to encapsulate the QDs in different types of liposomes and deliver them
into stem cells. The empty and containing CdTe QDs liposomes were characterized by
fluorescence microscopy, transmission electron microscopy, size and zeta potential. A new in
vivo targeting and imaging method for U87 glioblastoma tumor type xenotransplanted into male
swiss mice brain using aqueous colloidal CdTe quantum dots conjugated to anti-GFAP (CdTeanti-
GFAP QDs) was developed. The red emitting CdTe QDs and the conjugated red-emitting
CdTe QDs were used to label U87 tumor cell line in vitro and health astrocytes. Toxicity of
isolated green (530 nm) and red (644 nm) emitting CdTe QDs, was evaluated using MTT assay
applied to U87 cells. The tumor growth was visualized inside the brain by the hematoxylin and
eosin staining and showed the successful delivery of the U87 cells into the brain parenchyma.
CdTe-anti-GFAP QDs were injected into the tumor region and their uptake by the U87 cell line
was visualized by fluorescence microscopy, showing specific double-labeling of vimentinimmunoreactive
glioblastoma. Compared to U87 tumor cells, which easily take up anti-GFAP
conjugated red-emitting CdTe QDs, healthy astrocytes kept in primary cultures offered more
resistance to their incorporation and were weakly labeled. The results reported here provide new
perspectives for using CdTe QDs in gliobastoma detection, suggesting their potential application
in imaging-guided surgery.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/14925
Date24 March 2014
CreatorsSEABRA, Maria Aparecida Barreto Lopes
Contributorshttp://lattes.cnpq.br/2234463053019457, SANTOS, Beate Saegesser, MOURA NETO, Vivaldo
PublisherUniversidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Farmaceuticas, UFPE, Brasil
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguageBreton
Detected LanguageEnglish
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
RightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess

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