L'endothéline (ET-1) est un puissant vasoconstricteur constitué de 21 acides aminés et de deux ponts disulfures intramoléculaires qui provient d'un précurseur prépro-ET, composé de 212 acides aminés.L'hydrolyse de ce précurseur par des peptidases conduit à la Big-ET-1, peptide de 38 acides aminés. A ce jour, il existe deux voies de synthèses distinctes de l'ET-1 à partir de la Big-ET-1. La voie classique de conversion de la Big-ET1 en ET-1 se produit via l'enzyme de conversion de l'endothéline (ECE). Une seconde voie alternative via la chymase mMCP-4, une protéase à sérine, produit un intermédiaire de 31 acides aminés, l'ET-1 (1-31), à partir de la Big-ET-1. Par la suite, l'ET-1 (1-31) subit une hydrolyse pour former l'ET-1 par l'endopeptidase neutre (NEP). Les souris dont le gène mMCP-4 a été supprimé devraient montrer une capacité moindre à convertir la Big-ET-1 en ET-1 (1-31). Le but principal de ce mémoire est d'identifier la contribution de la mMCP-4 dans la conversion de la Big-ET-1 en ET-1 (1-31). L'activité spécifique de la chymotrypsine a été déterminée par des essais fluorogénique in vitro dans les fractions solubles des différents organes tels que, le ventricule gauche cardiaque, les poumons, l'aorte, le cortex rénal et la médulla rénale. Cette activité a été diminuée d'une manière significative dans les fractions solubles des tissus de souris mMCP-4 K.O. en comparant à celles de souris de type sauvage. De plus, l'activité spécifique de la chymase a été diminuée d'une manière significative en présence d'un inhibiteur spécifique, le TY-51469, chez la souris de type sauvage. Par ailleurs, son effet est absent chez la souris mMCP-4 K.O., suggérant ainsi que cet inhibiteur est sélectif pour l'activité de la chymase. Des analyses d'HPLC couplés à la spectrométrie de masse (MS), ont permis de montrer une conversion de la Big-ET-1 en ET-1 (1-31) par la chymase dans les fractions solubles des tissus de souris de type sauvage. Cette conversion a été abolie dans les fractions des tissus de souris de type sauvage prétraités au TY-51469, confirmant ainsi le rôle de la chymase dans la conversion de la Big-ET-1 en ET-1 (1-31). Ces résultats ont été confirmés par l'absence de conversion de la Big-ET-1 en ET-1 (1-31) dans les fractions solubles des tissus de souris mMCP-4 K.O. Notre étude a permis de confirmer la conversion de la Big-ET-1 en ET-1 (1-31) par la mMCP-4 via la voie alternative dépendante de la chymase chez la souris de type sauvage in vitro .
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usherbrooke.ca/oai:savoirs.usherbrooke.ca:11143/5551 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Jamain, Marc-David |
| Contributors | D'Orléans Juste, Pedro |
| Publisher | Université de Sherbrooke |
| Source Sets | Université de Sherbrooke |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Mémoire |
| Rights | © Marc-David Jamain |
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