In vitro, la dégradation de la matrice extracellulaire (MEC) par ces cellules invasives est effectuée par les invadopodes, des protrusions cellulaires dotées d’une activité de protéolyse émanant de la membrane ventrale de cellules cultivées sur des substrats bidimensionnels. Le facteur d'échange (GEF) Fgd1, un GEF spécifique de Cdc42, a été montré comme étant un des composants des invadopodes. Nonobstant, la façon dont Fgd1 est régulé n’est pas encore connue. Mon projet visait à élucider la régulation de Fgd1 dans les cellules cancéreuses invasives. J'ai montré que la distribution subcellulaire de la protéine endogène varie au cours des différentes étapes de la formation des invadopodes et que Fgd1 s'accumule aux sites de formation des invadopodes et ce de façon concomittante à l'assemblage du noyau F-actine/cortactine. La partie N –terminale de la molécule est essentielle pour la localisation aux invadopodes. En outre, la Filamine A (FLNa) a été identifiée comme un nouveau partenaire de liaison in vitro et in vivo. J’ai de plus montré que FLNa colocalise avec Fgd1 aux invadopodes et est nécessaire pour leur formation et leur fonction. J'ai émis l'hypothèse que FLNa puisse être impliquée dans la dégradation de Fgd1 par le protéasome, un processus étroitement lié au niveau de l'activation de Cdc42. Dans mon modèle, FLNa agirait comme une protéine d’échafaudage pour connecter Fgd1 et Cdc42 et ainsi réguler localement l'activation de la GTPase, mais également pour stabiliser Fgd1 en empêchant sa dégradation par le protéasome. Dans l'ensemble, mes résultats apportent de nouveaux éléments concernant le rôle de Fgd1 dans la biogénèse des invadopodes / In vitro, degradation of the extracellular matrix (ECM) by invasive tumor cells is carried out by invadopodia, proteolytically active protrusions emanating from the ventral membrane of cells cultured on two dimensional ECM substrates. Identification and characterization of novel molecular components of the invadopodia machinery is now witnessing a relevant interest. The guanine nucleotide exchange factors (GEFs) Fgd1, a specific GEF for Cdc42, has been recently brought into the picture of invadopodia components and regulators. Notwithstanding, how Fgd1 is regulated in invasive cancer cells remains poorly understood. My project aimed to further elucidate Fgd1 regulation in cancer cells. I showed that the cellular distribution of endogenous Fgd1 quantitatively changes along the different stages of invadopodia formation, and that Fgd1 accumulates at invadopodia sites concomitantly with the initial assembling of the actin/cortactin core. The N-terminal proline rich domain (PRD) of Fgd1 is essential for its localization and function at invadopodia. Furthermore, using a yeast two hybrid approach, Filamin A (FLNa) was identified as a novel Fgd1 binding partner and this interaction was validated in vivo. I report that FLNa co-localizes with Fgd1 at invadopodia and is required for their formation and function. I hypothesized that FLNa may be involved in the SCF FWD1/β-TrCP –mediated proteasome degradation of Fgd1, a process that is strictly connected to the Cdc42 activation rate. In my model, FLNa may act as a scaffold to connect Fgd1 and Cdc42 for local activation of the small GTPase, and to increase Fgd1 stability by preventing its proteasomal degradation. Taken together, my findings provide novel insights on the role of Fgd1 in invadopodia biogenesis
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2014BORD0184 |
| Date | 17 September 2014 |
| Creators | Ciufici, Paolo |
| Contributors | Bordeaux, Génot, Elisabeth |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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