Insulin regulated aminopeptidase (IRAP) was first identified in fat and muscle cells where it is believed to regulate GLUT4 translocation. It has since been found to be behind a variety of functions, many not yet fully understood. Preliminary research from Monash University suggested that IRAP may play a role in cellular senescence. Senescence is a term that describes arrested cell division and is a tumor repressive mechanism. Senescent cells have been shown to secrete, among other things, the growth hormone TGFβ1, which in turn plays an important role in the cell differentiation of fibroblasts to myofibroblasts. The potential link between IRAP and senescence was the basis of this work. Senescent fibroblasts from three different passages (n=3) in the BJ3 cell-line were cultured and treated with different IRAP inhibitors; ANG-4, AL06 and HFI-419 which were all compared to an untreated control group. They were marked with a β-galactosidase stain, a senescent cellmarker, and imaged. The study demonstrated that the IRAP inhibitors led to a certain decrease in % of senescent cells compared to the control groups. However, this reduction was not considered statistically significant. Similarly, inhibition of the enzyme did not indicate any influence over the differentiation of the cells. The lack of effect could be due to chance based on the low number of sample size, or the condition of the cells used in the trial as they were partially immortalized BJ fibroblasts well beyond the passage of their intended use. In order to further demonstrate an association between IRAP and senescence, further trials are required. / Insulin reglerad aminopeptidas (IRAP) introducerades till en början som ett markörprotein. Man har sedan dess funnit att den står bakom en rad olika funktioner, många ännu inte fullt klarlagda. Preliminär forskning från laboratoriet i Monash University tydde på att IRAP kan ha en koppling till senescerande fibroblaster. Senescence är en term som beskriver upphörd celldelning och är en tumörrepressiv mekanism. Senescerande celler har påvisats utsekrera bland annat tillväxthormonet TGFβ1, som i sin tur spelar en viktig roll i celldifferentieringenav fibroblaster till myofibroblaster. Den potentiella kopplingen mellan IRAP och senescence låg som grund till detta arbete. Senescerande fibroblaster från tre olika kulturer (n=3) i BJ3-cellinjen odlades och behandlades med olika IRAP-inhibitorer; ANG-4, AL06 och HFI-419 som alla jämfördes med en kontrollgrupp. Därefter markerades de med en β-galaktosidas-markör, en markör för senescerande celler, och mikroskoperades. Studien påvisade att IRAP-inhibitorerna ledde till en viss procentuell minskning av senescerande celler jämfört med kontrollgrupperna. Dock bedömdes inte denna minskning som statistiskt signifikant i studien. Likväl fann man ingen procentuell minskning av differentierade fibroblaster. Hypotetiskt sett skulle man vilja se att reduktionen av senescerande celler motsvarade en nedreglering av TGFβ1-proteiner. Eftersom närvaron av TGFβ1 tros spela en ledande roll i celldifferentiering till myofibroblastfenotypen, bör den procentuella mängden differentierade cellerna minska med inhibitorbehandlingarna. Den bristande påverkan av enzyminhibitionen kan bero på en rad olika faktorer. Cellerna som användes under försökets gång var väl bortom deras brukliga användningscykel. För att vidare påvisa ett potentiellt samband mellan IRAP och senescence behöver vidare försök utföras.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:uu-417314 |
| Date | January 2020 |
| Creators | Tawfik, Dalya |
| Publisher | Uppsala universitet, Institutionen för farmaceutisk biovetenskap |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.002 seconds