nÃo hà / No mundo, existem cerca de 3.000 espÃcies de serpentes das quais 10 a 14% sÃo peÃonhentas. Dentre os paÃses sul-americanos, o Brasil à o que apresenta maior nÃmero de acidenÂtes/ano com cerca de 20.000 acidentes ofÃdicos por ano. De acordo com o MinistÃrio da SaÃde, as serpentes do gÃnero Bothrops sÃo as principais envolvidas nos acidentes ofÃdicos no paÃs e a insuficiÃncia renal aguda (IRA) à uma complicaÃÃo grave dos envenenamentos produzidos por estas serpentes. Tendo em vista que a fraÃÃo L-aminoÃcido oxidase (LAAO) constitui grande parte da composiÃÃo total do veneno de serpentes, em algumas serpentes chegando a constituir mais de 30% do total de proteÃnas do veneno, neste trabalho, foram investigados os efeitos renais da fraÃÃo L-aminoÃcido oxidase isolada do veneno da serpente Bothrops marajoensis (LAAOBM) em sistema de perfusÃo de rim isolado e em cultura de cÃlulas tubulares renais da linhagem MDCK (Madin-Darby Canine Kidney). Para perfusÃo de rim isolado foram utilizados ratos Wistar pesando entre 250 e 300g, cujos rins foram excisados cirurgicamente e perfundidos com soluÃÃo de Krebs-Hanseleit contendo 6%p/v de albumina bovina previamente dialisada. Foram investigados os efeitos da LAAOBM (10 Âg/mL; n=4) sobre a PressÃo de PerfusÃo (PP), ResistÃncia Vascular Renal (RVR), Fluxo UrinÃrio (FU), Ritmo de FiltraÃÃo Glomerular (RFG), Percentual de Transporte Tubular Proximal de SÃdio (%pTNa+),Percentual de Transporte Tubular de SÃdio (%TNa+), de PotÃssio (%TK+) e de Cloreto (%TCl-). As cÃlulas MDCK foram cultivadas em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de Soro Bovino Fetal e entÃo incubadas com a LAAOBM nas concentraÃÃes de 50; 25; 12,5; 6,25; 3,125 e 1,652 Âg/mL. ApÃs 24 horas de incubaÃÃo, foram realizados os ensaios de viabilidade e proliferaÃÃo celular utilizando-se o mÃtodo do MTT. A LAAOBM promoveu uma reduÃÃo da pressÃo de perfusÃo aos 90 minutos de experimento e esta reduÃÃo foi ainda discretamente maior aos 120 minutos. Observou-se tambÃm queda da resistÃncia vascular renal aos 120 minutos. Houve uma queda abrupta e acentuada do fluxo urinÃrio aos 90 minutos que, apesar da tendÃncia à recuperaÃÃo observada aos 120 minutos, ainda mostrou-se bastante reduzido quando comparado ao grupo controle. A infusÃo da LAAOBM tambÃm promoveu uma reduÃÃo do ritmo de filtraÃÃo glomerular aos 90 minutos quando comparada ao grupo controle e este parÃmetro manteve-se ainda no mesmo patamar de reduÃÃo aos 120 minutos. A LAAOBM reduziu gradativamente o percentual de transporte tubular de sÃdio aos 90 e 120 minutos e o percentual de transporte tubular de cloreto nos tempos de 60, 90 e 120 minutos. A anÃlise histolÃgica dos rins perfundidos com LAAOBM mostrou a presenÃa de alteraÃÃes morfolÃgicas significativas, como acÃmulo de proteÃnas nos espaÃos tubulares e glomerulares. Na cultura de cÃlulas MDCK a LAAOBM promoveu uma reduÃÃo da viabilidade celular a partir da concentraÃÃo de 3,25Âg/mL atà a concentraÃÃo de 50Âg/mL, com valor da CI50 de 2,43Âg/mL. Foram observadas tambÃm, atravÃs de microscÃpio Ãptico invertido, alteraÃÃes morfolÃgicas destas cÃlulas, tais vacuolizaÃÃo citoplasmÃtica, alteraÃÃo do estado de confluÃncia e desprendimento das mesmas do substrato de cultura. Estes resultados demonstram que a LAAOBM alterou todos os parÃmetros vasculares e renais avaliados na perfusÃo de rim isolado e possui aÃÃo citotÃxica sobre as cÃlulas MDCK apÃs 24 horas de incubaÃÃo. / There are about 3.000 species of snakes worldwide, but only 10 to 14% are venomous. Among South American countries, Brazil is the one with the largest number of accidents, with approximately 20.000 snakebites each year. According to the Department of Health of Brazil, the genus Bothrops are the main involved in snakebites in the country. Acute renal failure (ARF) is a serious complication of snake poisoning. The fraction L-amino acid oxidase (LAAO) constitutes a main part of the total composition of snake venoms. In some cases this amount can reach 30% of total venom proteins. The renal effects of fraction L-amino acid oxidase isolated from the venom of Bothrops marajoensis (LAAOBM) was investigated in this study. Isolated perfused rat kidney and the cultured renal tubular cells line MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) were used here. For the isolated perfused rat kidney method, we used Wistar rats weighing between 250 and 300. Their right kidneys were surgically excised and perfused with Krebs-Hanseleit containing 6% w/v bovine albumin previously dialyzed. The effects of LAAOBM (10 mg/mL, n=4) were analyzed on the Perfusion Pressure (PP), Renal Vascular Resistance (RVR), Urinary Flow (UF), Glomerular Filtration Rate (GFR) Percentage of Sodium Proximal Tubular Transport (%pTNa+), Percentage of Sodium (%TNa+), Potassium (%TK+) and Chloride (%TCl-) Tubular Transport. MDCK cells were cultured in RPMI 1640 medium supplemented with 10% v/v fetal bovine serum and incubated with LAAOBM at concentrations of 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125 and 1.652 mg/mL. After 24 hours of incubation, assays were performed on cell proliferation and viability using the MTT method. The LAAOBM promoted a reduction of perfusion pressure at 90 minutes of the experiment and this reduction was even slightly higher at 120 minutes. It was also observed decrease in renal vascular resistance at 120 minutes. There was a sharp and sudden drop in urine flow at 90 minutes, despite the tendency of recovery observed at 120 minutes, still proved to be quite small when compared to the control group. The infusion of LAAOBM also promoted a reduction in glomerular filtration rate at 90 minutes compared to the control group and this parameter still remained at the same level of reduction at 120 minutes. The LAAOBM gradually reduced the percentage of sodium tubular transport at 90 and 120 minutes and the percentage of chloride tubular transport in the periods of 60, 90 and 120 minutes. Histological analysis of kidneys perfused with LAAOBM showed the presence of significant morphological changes such as accumulation of proteins in tubular and glomerular spaces. In the MDCK cell culture LAAOBM promoted a reduction in cell viability from concentrations of 3.25 mg / mL until 50μg/mL, with IC50 value of 2.43 mg/mL. Inverted light microscopy showed morphological changes of these cells, such as vacuolation, alteration of the state of confluence and detachment of the substrate culture. These results demonstrated that LAAOBM changed all the parameters evaluated in renal and vascular perfusion of isolated kidney and had cytotoxic activity on MDCK cells after 24 hours of incubation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:4326 |
| Date | 03 August 2010 |
| Creators | Rodrigo Tavares Dantas |
| Contributors | Helena Serra Azul Monteiro, JanaÃna Serra Azul Monteiro Evangelista, Alexandre Havt Bindà |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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