Nos últimos anos a eletroforese capilar tem substituído a eletroforese em gel e está sendo usada para uma ampla variedade de aplicações forenses, incluindo tipagem de DNA. A fim de superar as desvantagens com relação à análise simultânea de amostras que a eletroforese em gel oferece, equipamentos com arranjos de capilares foram idealizados, assim como a possibilidade de análises multiplexadas em um único capilar por meio da utilização de corantes intercaladores. Neste trabalho foi otimizada a metodologia para amplificação de DNA pela reação em cadeia da polimerase para sete primers correspondentes a sete regiões padronizadas e legalmente aceitas para testes de paternidade. Três casos foram avaliados por eletroforese em microchip, indicando que um método mais reprodutível e de maior resolução deveria ser utilizado, fato que levou ao desenvolvimento de um método para separação de um padrão de tamanho de DNA de 25 pares de base por eletroforese capilar em soluções poliméricas em um equipamento comercial. Este método foi aplicado à separação do mesmo padrão intercalado a um corante dimérico em um equipamento de eletroforese capilar lab-made miniaturizado, com detecção espectrofotométrica na região visível, sugerindo a possibilidade de o equipamento desenvolvido ser utilizado para análises genéticas multiplexadas com custo e tempo minimizados. / In recent years capillary electrophoresis has substituted slab gel electrophoresis and has been used in a variety of forensic applications, such as DNA typing. In order to overcome the disavantages regarding the simultaneous samples analysis that slab gel offers, equipments with capillary arrays were developed, as well as the possibility of multiplex analysis in a single capillary by using intercalating dyes. In this work the metodology to amplify DNA by polimerase chain reaction was studied to seven primers corresponding to seven standardized and legaly accepted regions in paternity tests. Three cases were evaluated by microchip electrophoresis, indicating the need for a more reproductive and with better resolution method has to be used. This fact lead to the development of a method to separate a 25 base pairs DNA ladder by gel capillary electrophoresis in a comercial equipment. In the sequence, this method was apllied to the separation of the same ladder intercalated to a dimeric dye in a lab-made miniaturized capillary electrophoresis system with spectrophotometric detection at visible region, suggesting that the developed equipment can be used for multiplexed genetic analysis with reduced cost and time.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-29082007-170308 |
| Date | 20 April 2007 |
| Creators | Fraige, Karina |
| Contributors | Carrilho, Emanuel |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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